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Communication
La fructose-1,6-bisphosphatase (Fru-1,6-P2ase, EC 3.1.3.11) catalyse l’hydrolyse du fructose-1,6-bisphosphate (F-1,6-P2) en fructose 6-phosphate (F-6-P) et phosphate inorganique (Pi). Cette enzyme joue un rôle central dans la régulation globale de la gluconéogénèse puisqu'elle constitue la dernière enzyme spécifique de cette voie métabolique. L’activité catabolique de la Fru-1,6-P2ase requiert des ions métalliques divalents tels que Mg2+, Mn2+ et Zn2+ et certains cations monovalents tels que K+, NH4+ et Tl+. La cristallisation de la fructose-1,6-biphosphatase musculaire humaine a été publiée pour la première fois en mars 2001 (Zhu, D.-W., Xu, G.-J., Rehse, P.H., Shi, R., Zhao, F.-K and Lin, S.-X. (2001) Acta Crystallogr. …
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La première structure tridimensionnelle de la 3alpha-hydroxystéroïde déshydrogénase humaine de type 3 (3alpha-HSH3, AKR1C2), une enzyme jouant un rôle critique dans le métabolisme des stéroïdes, a été déterminée par cristallographie en complexe avec la testostérone et le NADP à 1.25 de résolution. L'activité 17beta-HSD de l'enzyme a été étudiée en comparaison de son activité 3alpha-HSD. L'enzyme catalyse l'inactivation de la dihydrotestostérone en 5alpha-androstane-3alpha,17beta-diol (3alpha-diol) ainsi que la transformation de l'androstenediol en testostérone. Utilisant notre préparation très homogène et très active de l'enzyme, nous avons obtenu une spécificité de l'activité 3alpha-HSD 150 fois plus grande que les valeurs précédemment rapportées dans …
Communication
Les études de cristallogénèse effectuées sur des macromolécules biologiques visent une compréhension des processus de nucléation et de croissance des cristaux et la recherche d’une façon permettant d’améliorer la qualité de ces cristaux. La 3alpha-hydroxystéroïde déshydrogénase de type 3 (3alpha-HSD3) couplée à la glutathione sulfotransférase (GST) a été surproduite dans Escherichia coli. L’enzyme purifiée a ensuite été cristallisée sous forme de complexe avec le NADP+ et la testostérone (Zhu et al., 2001). Lors de cette étude, nous cherchons une correlation entre les différentes conditions de croissance des cristaux (e.g. la nature de l’agent cristallisant, sa solubilité, la supersaturation de la …
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Les études de cristallogénèse effectuées sur des macromolécules biologiques visent une compréhension des processus de nucléation et de croissance des cristaux et la recherche d’une façon permettant d’améliorer la qualité de ces cristaux. La 3alpha-hydroxystéroïde déshydrogénase de type 3 (3alpha-HSD3) couplée à la glutathione sulfotransférase (GST) a été surproduite dans Escherichia coli. L’enzyme purifiée a ensuite été cristallisée sous forme de complexe avec le NADP+ et la testostérone (Zhu et al., 2001). Lors de cette étude, nous cherchons une correlation entre les différentes conditions de croissance des cristaux (e.g. la nature de l’agent cristallisant, sa solubilité, la supersaturation de la …
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Les études de cristallogénèse effectuées sur des macromolécules biologiques visent une compréhension des processus de nucléation et de croissance des cristaux et la recherche d’une façon permettant d’améliorer la qualité de ces cristaux. La 3alpha-hydroxystéroïde déshydrogénase de type 3 (3alpha-HSD3) couplée à la glutathione sulfotransférase (GST) a été surproduite dans Escherichia coli. L’enzyme purifiée a ensuite été cristallisée sous forme de complexe avec le NADP+ et la testostérone (Zhu et al., 2001). Lors de cette étude, nous cherchons une correlation entre les différentes conditions de croissance des cristaux (e.g. la nature de l’agent cristallisant, sa solubilité, la supersaturation de la …
Colloque
La 17beta-hydroxystéroïde déhydrogénase est une enzyme clé pour la synthèse des hormones actif à partir des précurseurs stéroïdiens. Elle catalyse une réaction d'oxido-réduction réversible entre l'estradiol et l'estrone en présence des cofacteurs NAD(H) ou NADP(H). Cette enzyme est capable d'utiliser les deux cofacteurs NAD(H) et NADP(H), mais avec une affinité 100 fois plus élevée pour le NADP+ par rapport au NAD+. Pour comprendre la base structurale de la liaison des cofacteurs, nous avons résolu par crystallographie trois structures tridimentionnelles de la 17beta-HSD1 en liaison avec le NAD à une résolution de 2.5 A, et en liaison avec un inhibiteur (EM553) …
Colloque
La 17b-hydroxystéroïde déshydrogénase de type 1 humaine (17b-HSD1) joue un rôle important dans la conversion des estrogènes. Sa principale activité est de convertir l’estrone en 17b-estradiol en utilisant un cofacteur, le NAD(P)H. La molécule EM519 est le nom donné au 17a-butyl-17b-estradiol, un inhibiteur compétitif de la 17b-HSD1. Notre groupe a cristallisé le complexe ternaire 17bHSD1-NADP+-EM519 par la méthode de co-cristallisation. L’enzyme a été purifiée à l’aide d’une colonne Mono Q et à été concentrée en présence de 20% glycérol et de 0,06% b-octylglucoside. La concentration finale de l’échantillon est supérieure à 15 mg/ml. La méthode de diffusion de vapeur a …
Colloque
La 17ß-hydroxystéroïde déshydrogénase (17ß-HSD) de placenta humain est à base de la conversion des œstrogènes qui stimulent le cancer du sein. Afin d’étudier cette enzyme d’importance majeure dans le cancer du sein, nous avons projeté la cristallisation de la 17ß-HSD afin d’obtenir sa structure tridimensionnelle. La technique de diffusion en vapeur a été utilisée. Le réservoir contenait du polyéthylèneglycol (4%) et MgCl2 à pH 7.5. Les premiers cristaux du complexe 17ß-HSD-NADP+ ont pu être obtenus. Ce type de cristal diffracte jusqu’à une résolution de 2.2 . La structure de la 17ß-HSD est maintenant déterminée. Présentement, les cristaux d’aponezyme et de …
Colloque
Nous avons obtenu en laboratoire des cristaux du complexe 17ß-HSD-NADP+ à une bonne résolution (2,4 pour une série de donnée complète). La 17ß-HSD est sélectionnée dans un concours subventionné par l'agence spatiale canadienne pour l'étude de la cristallogenèse en espace dans la station spatiale MIR. En micro-gravité, l'effet de la convection et les différences de densités entre la protéine et les autres composants du milieu sont éliminées, permettant, en principe, l'obtention de cristaux avec une meilleure morphologie et qualité de diffraction. Nous avons obtenus des préparations de la 17ß-HSD hautement actives et une série de conditions cristallisatoires sont en train …
Colloque
La cristallogénèse et la cristallographie de la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) peuvent mener à la détermination de la structure tridimensionnelle fournissant des informations plus précises concernant la structure de cette enzyme critique dans la formation des stéroïdes hormonaux. L'enzyme est purifiée par chromatographie d'affinité (Sepharose bleue) à homogénéité et haute activité dans environ 6 heures. Cette préparation est concentrée en présence du détergent octyl-glycoside jusqu'à 20 mg/ml. La 17β-HSD est cristallisée en utilisant le PEG (4 k) comme précipitant en présence de NADP+ saturé avec la technique de diffusion en vapeur. Le cristal du complexe 17β-HSD-NADP+ donne une résolution jusqu'à 2.7 …
