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Colloque
La 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase/isomérase (3β-HSD) est une protéine membranaire présente dans les microsomes ou les mitochondries. Elle possède les deux activités suivantes: la déshydrogénation et l'isomérisation. Cette enzyme est aussi responsable de la formation de la progestérone et de l'androsténédione dans les tissus périphériques. Pour étudier la relation entre la structure et la fonction de la 3β-HSD, nous avons réussi à purifier cette enzyme tout en conservant une haute activité. La 3β-HSD a été exprimée dans les cellules Sf9 en utilisant un système de baculovirus recombinant. Les cellules Sf9 ont été lysées en présence d'un détergent anionique 0.6% désoxycholate. Le surnageant …
Colloque
Nous avons obtenu en laboratoire des cristaux du complexe 17ß-HSD-NADP+ à une bonne résolution (2,4 pour une série de donnée complète). La 17ß-HSD est sélectionnée dans un concours subventionné par l'agence spatiale canadienne pour l'étude de la cristallogenèse en espace dans la station spatiale MIR. En micro-gravité, l'effet de la convection et les différences de densités entre la protéine et les autres composants du milieu sont éliminées, permettant, en principe, l'obtention de cristaux avec une meilleure morphologie et qualité de diffraction. Nous avons obtenus des préparations de la 17ß-HSD hautement actives et une série de conditions cristallisatoires sont en train …
Colloque
La chromatographie par FPLC, en plus d'être rapide, présente les avantages de qualité et d'économie. Nous avons utilisé la caractéristique de l'élution rapide sur gel de Sépharose afin d'élaborer une nouvelle méthode permettant la réduction des étapes de purification. Le Sépharose, ainsi que les gels similaires (Q-Sépharose, Blue-Sépharose, et phenyl-Sépharose etc.), permettent une élution rapide, une bonne résolution et de bons rendements. Premièrement, les échantillons ont été directement déposés sur la colonne, éliminant ainsi l'étape de la dialyse. Deuxièmement, une faible concentration de sel a été utilisée lors du dépôt de grands volumes d'échantillons entraînant ainsi une réduction de la …
Colloque
La chromatographie par FPLC, en plus d'être rapide, présente les avantages de qualité et d'économie. Nous avons utilisé la caractéristique de l'élution rapide sur gel de Sépharose afin d'élaborer une nouvelle méthode permettant la réduction des étapes de purification. Le Sépharose, ainsi que les gels similaires (Q-Sépharose, Blue-Sépharose, et phenyl-Sépharose etc.), permettent une élution rapide, une bonne résolution et de bons rendements. Premièrement, les échantillons ont été directement déposés sur la colonne, éliminant ainsi l'étape de la dialyse. Deuxièmement, une faible concentration de sel a été utilisée lors du dépôt de grands volumes d'échantillons entraînant ainsi une réduction de la …
