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Colloque
La chromatographie par FPLC, en plus d'être rapide, présente les avantages de qualité et d'économie. Nous avons utilisé la caractéristique de l'élution rapide sur gel de Sépharose afin d'élaborer une nouvelle méthode permettant la réduction des étapes de purification. Le Sépharose, ainsi que les gels similaires (Q-Sépharose, Blue-Sépharose, et phenyl-Sépharose etc.), permettent une élution rapide, une bonne résolution et de bons rendements. Premièrement, les échantillons ont été directement déposés sur la colonne, éliminant ainsi l'étape de la dialyse. Deuxièmement, une faible concentration de sel a été utilisée lors du dépôt de grands volumes d'échantillons entraînant ainsi une réduction de la …
Colloque
La double réaction de déshydrogénation et d'isomération qui permet la conversion des précurseurs stéroïdiens Δ5-3β-hydroxy en leur configuration Δ4-3-céto, est l'étape limitante, du point de vue cinétique, de la biosynthèse de toutes les classes de stéroïdes hormonaux. Cette double réaction est catalysée par une seule enzyme membranaire, la 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase (3β-HSD). Pour faciliter sa purification et obtenir les quantités nécessaires pour les études structure-fonction, nous avons surproduit la 3β-HSD en utilisant le système d'expression basé sur l'infection de cellules d'insectes (Spodoptera frugiperda) par un baculovirus recombinant. Ce baculovirus porte, dans son génome, le cDNA de la 3β-HSD dont l'expression est …
