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Communication
La première structure tridimensionnelle de la 3alpha-hydroxystéroïde déshydrogénase humaine de type 3 (3alpha-HSH3, AKR1C2), une enzyme jouant un rôle critique dans le métabolisme des stéroïdes, a été déterminée par cristallographie en complexe avec la testostérone et le NADP à 1.25 de résolution. L'activité 17beta-HSD de l'enzyme a été étudiée en comparaison de son activité 3alpha-HSD. L'enzyme catalyse l'inactivation de la dihydrotestostérone en 5alpha-androstane-3alpha,17beta-diol (3alpha-diol) ainsi que la transformation de l'androstenediol en testostérone. Utilisant notre préparation très homogène et très active de l'enzyme, nous avons obtenu une spécificité de l'activité 3alpha-HSD 150 fois plus grande que les valeurs précédemment rapportées dans …
Colloque
La 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase/isomérase (3β-HSD) est une protéine membranaire présente dans les microsomes ou les mitochondries. Elle possède les deux activités suivantes: la déshydrogénation et l'isomérisation. Cette enzyme est aussi responsable de la formation de la progestérone et de l'androsténédione dans les tissus périphériques. Pour étudier la relation entre la structure et la fonction de la 3β-HSD, nous avons réussi à purifier cette enzyme tout en conservant une haute activité. La 3β-HSD a été exprimée dans les cellules Sf9 en utilisant un système de baculovirus recombinant. Les cellules Sf9 ont été lysées en présence d'un détergent anionique 0.6% désoxycholate. Le surnageant …
Colloque
La cristallogénèse et la cristallographie de la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) peuvent mener à la détermination de la structure tridimensionnelle fournissant des informations plus précises concernant la structure de cette enzyme critique dans la formation des stéroïdes hormonaux. L'enzyme est purifiée par chromatographie d'affinité (Sepharose bleue) à homogénéité et haute activité dans environ 6 heures. Cette préparation est concentrée en présence du détergent octyl-glycoside jusqu'à 20 mg/ml. La 17β-HSD est cristallisée en utilisant le PEG (4 k) comme précipitant en présence de NADP+ saturé avec la technique de diffusion en vapeur. Le cristal du complexe 17β-HSD-NADP+ donne une résolution jusqu'à 2.7 …
Colloque
La double réaction de déshydrogénation et d'isomération qui permet la conversion des précurseurs stéroïdiens Δ5-3β-hydroxy en leur configuration Δ4-3-céto, est l'étape limitante, du point de vue cinétique, de la biosynthèse de toutes les classes de stéroïdes hormonaux. Cette double réaction est catalysée par une seule enzyme membranaire, la 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase (3β-HSD). Pour faciliter sa purification et obtenir les quantités nécessaires pour les études structure-fonction, nous avons surproduit la 3β-HSD en utilisant le système d'expression basé sur l'infection de cellules d'insectes (Spodoptera frugiperda) par un baculovirus recombinant. Ce baculovirus porte, dans son génome, le cDNA de la 3β-HSD dont l'expression est …
Colloque
La double réaction de déshydrogénation et d'isomération qui permet la conversion des précurseurs stéroïdiens Δ5-3β-hydroxy en leur configuration Δ4-3-céto, est l'étape limitante, du point de vue cinétique, de la biosynthèse de toutes les classes de stéroïdes hormonaux. Cette double réaction est catalysée par une seule enzyme membranaire, la 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase (3β-HSD). Pour faciliter sa purification et obtenir les quantités nécessaires pour les études structure-fonction, nous avons surproduit la 3β-HSD en utilisant le système d'expression basé sur l'infection de cellules d'insectes (Spodoptera frugiperda) par un baculovirus recombinant. Ce baculovirus porte, dans son génome, le cDNA de la 3β-HSD dont l'expression est …
Colloque
La double réaction de déshydrogénation et d'isomération qui permet la conversion des précurseurs stéroïdiens Δ5-3β-hydroxy en leur configuration Δ4-3-céto, est l'étape limitante, du point de vue cinétique, de la biosynthèse de toutes les classes de stéroïdes hormonaux. Cette double réaction est catalysée par une seule enzyme membranaire, la 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase (3β-HSD). Pour faciliter sa purification et obtenir les quantités nécessaires pour les études structure-fonction, nous avons surproduit la 3β-HSD en utilisant le système d'expression basé sur l'infection de cellules d'insectes (Spodoptera frugiperda) par un baculovirus recombinant. Ce baculovirus porte, dans son génome, le cDNA de la 3β-HSD dont l'expression est …
Colloque
La 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) est responsable de la conversion des stéroïdes surrénaliens en androgènes et estrogènes qui stimulent le cancer de la prostate et le cancer du sein. La compréhension des mécanismes de catalyse et de régulation ainsi que le rôle de la 17β-HSD dans le métabolisme hormonal est crucial pour au blocage de cette enzyme. L'enzyme (placenta humain) est rapidement purifiée à homogénéité en utilisant les techniques de PFLC. Les poids moléculaires apparents de cette enzyme dénaturée et native sont respectivement de 34 KDa mesuré par électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE) en présence de SDS et de 68 …
Colloque
La 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) est une enzyme clé de la transformation, au niveau des tissus périphériques, des précurseurs surrénaliens et des androgènes qui stimulent le cancer de la prostate. La compréhension des mécanismes de catalyse et de régulation de cette enzyme est limitée. L'étude de la 17β-HSD et ses ligands pourrait permettre la synthèse d'inhibiteurs efficaces pour la thérapie enzymatique du cancer de la prostate. Pour faciliter la purification et obtenir les quantités nécessaires pour les études structurales, nous avons surproduit la 17β-HSD en utilisant le système d'expression basé sur l'infection de cellules d'insectes (Spodoptera frugiperda) par un baculovirus portant …
Colloque
La mesure de cinétique à l’état stationnaire de la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) par méthode TLC en séparant estradiol et estrone ou par surveillance de NADH Fluorescence a produit des résultats de haute sensibilité. Ce qui démontre, pour la première fois, deux sites distincts de cette enzyme pour le substrat estradiol ou le co-facteur NAD+. Dans chaque cas, 17β-HSD possède deux Km avec plus de 10 fois de différence dans leur valeur tandis que celle de deux Kcat ne diffèrent que de 2 ou 3 fois. Ce comportement asymétrique coïncide avec notre résultat sur la liaison de substrats et cofacteur par …
Colloque
La 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) est une enzyme clé de la transformation, au niveau des tissus périphériques, des précurseurs surrénaliens et des androgènes qui stimulent le cancer de la prostate. La compréhension des mécanismes de catalyse et de régulation de cette enzyme est limitée. L'étude de la 17β-HSD et ses ligands pourrait permettre la synthèse d'inhibiteurs efficaces pour la thérapie enzymatique du cancer de la prostate. Pour faciliter la purification et obtenir les quantités nécessaires pour les études structurales, nous avons surproduit la 17β-HSD en utilisant le système d'expression basé sur l'infection de cellules d'insectes (Spodoptera frugiperda) par un baculovirus portant …
