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Communication
Les proprotéines convertases (PC's) sont des protéases à sérine impliquées dans la conversion des précurseurs hormonaux en leur forme active, et possèdent un domaine catalytique semblable à celui des subtilisines. Le but de notre recherche est de concevoir des peptides cycliques de 17 acides aminés pouvant inhiber spécifiquement deux des enzymes de cette famille, PC1/3 et furine; la première n'est présente que dans les granules de sécrétion des cellules endocriniennes comparativement à la seconde qui est exprimée de façon ubiquiste. Les séquences peptidiques étudiées sont dérivées de la structure en boucle de 18 résidus identifiée comme étant le site actif …
Colloque
Le SLPi ou "secretory leukocyte protease inhibitor" est un inhibiteur de l'élastase et son rôle dans le mucus pourrait être de protéger l'endocol, à l'instar de l'α-antitrypsin et l'α-antichymotrypsin, contre les effets néfastes des protéases. Étant donné que les secrétions prostatiques sont riches en kallicréines et qu'elles sont en contact direct avec le mucus de l'endocol lors des relations sexuelles, l'objectif de cette étude était de regarder les effets des kallicréines sur ces inhibiteurs. Pour ce faire, des mucus ont été prélevés avec un instrument Aspiglaire (Biotech Int. France) et les protéines du mucus ont été séparées par SDS-PAGE. Parmi …
Colloque
Les prohormones convertases 1 et 2 sont des endoprotéases de type subtilisine impliquées dans la conversion des précurseurs hormonaux en peptides biologiquement actifs et hormones. Suite à leur clonage et à l’élucidation de leur séquence en acides aminés, il fut proposé qu’un segment peptidique localisé dans la portion COOH- terminale pouvait comporter une structure hélicale dotée de caractéristiques amphipatiques et éventuellement capable d’interagir avec des constituants membranaires. Dans le but de vérifier cette hypothèse, un peptide synthétique représentant les acides aminés 706 à 726 contenus dans la séquence de la prohormone convertase I murine (mPCI) fut préparé par synthèse en …
Colloque
Les prohormones convertases 1 et 2 sont des endoprotéases de type subtilisine impliquées dans la conversion des précurseurs hormonaux en peptides biologiquement actifs et hormones. Suite à leur clonage et à l’élucidation de leur séquence en acides aminés, il fut proposé qu’un segment peptidique localisé dans la portion COOH- terminale pouvait comporter une structure hélicale dotée de caractéristiques amphipatiques et éventuellement capable d’interagir avec des constituants membranaires. Dans le but de vérifier cette hypothèse, un peptide synthétique représentant les acides aminés 706 à 726 contenus dans la séquence de la prohormone convertase I murine (mPCI) fut préparé par synthèse en …
Colloque
Les prohormones convertases 1 et 2 sont des endoprotéases de type subtilisine impliquées dans la conversion des précurseurs hormonaux en peptides biologiquement actifs et hormones. Suite à leur clonage et à l’élucidation de leur séquence en acides aminés, il fut proposé qu’un segment peptidique localisé dans la portion COOH- terminale pouvait comporter une structure hélicale dotée de caractéristiques amphipatiques et éventuellement capable d’interagir avec des constituants membranaires. Dans le but de vérifier cette hypothèse, un peptide synthétique représentant les acides aminés 706 à 726 contenus dans la séquence de la prohormone convertase I murine (mPCI) fut préparé par synthèse en …
Colloque
Nous avons déjà montré que le liquide péritonéal contient une activité mitogénique. L'objectif de cette étude était de caractériser cette activité mitogène pour les cellules endométriales humaines. La purification a été faite sur colonnes de CM-Sepharose et d'heparine-sepharose, sur cartouche de silice C18 et par HPLC en phase inverse. L'activité mitogénique a été déterminée par l'incorporation de 3H-thymidine dans des cultures primaires de cellules épithéliales et stromales de l'endomètre humain. Quatre bandes distinctes (17-30 kDa) ont été décélées après séparation sur Sep-Pak et SDS-PAGE. Un microséquençage des bandes de 20 kDa et 25 kDa a révélé une homologie avec la …
Colloque
L'injection de cellules PA-III (adénocarcinome prostatique de rat) dans le tissu osseux produit le métastase ostéoblastique. Une protéase à sérine sécrétée par les cellules PA-III hydrolyse les protéines liant les IGFs (IGF-BP1 et IGF-BP2) détectées dans les milieux conditionnés des cellules UMR-106 (J. Endocr. Res. 12:905,1992). Cette protéase a été purifiée par chromatographie. Elle a ensuite été conditionnée avec des 45-50 kDa de protéine. En position moléculaire de réduction et est constituée de 33-50 kDa, et cette protéase a été sécrétée en condition réductrice de deux chaînes de 25kDa et de 50kDa. La protéase a été identifiée par la sérine …
Colloque
Notre équipe a récemment cloné deux DNA complémentaires codant pour les protéines mPCI et mPC2. Ces deux protéines ont récemment été rapportées comme étant des enzymes capables de couper les prohormones polypeptidiques au pairs d'acides aminés basiques produisant ainsi des hormones biologiquement actives. Afin de caractériser davantage ces deux protéines, nous avons cloné les DNA dans le vecteur pJVN de L.I.'isolement des recombinants de baculovirus devrait alors nous permettre de produire une grande quantité de protéines pouvant atteindre des ng/l de milieu de culture. Nous avons pu purifier ces protéines par affinité à l'aide d'anticorps développés contre la forme recombinante …
Colloque
À l'heure actuelle, un nombre important de techniques nous sont accessibles pour détecter la présence d'enzymes protéolytiques. Les plus couramment utilisées reposent sur l'emploi de courts substrats peptidiques auxquels est attaché un groupement chromogénique ou fluorogénique. Cependant, ces méthodes se révèlent souvent soit trop restrictives ou soit trop complexes et pas assez sensibles. Dans ce contexte, une méthode simple, rapide et sensible a été développée à partir de l'utilisation d'un substrat peptidique radiodé. Une extrémité est immobilisée de manière covalente par une de ses extrémités à une matrice insoluble et comporte à son autre extrémité un groupement radioactif. Deux substrats …
Colloque
La plupart des peptides/protéines biologiquement actifs sont produits via le clivage d'un précurseur, majoritairement aux paires d'acides aminés basiques. Le 7B2, qui est une protéine de 186 acides aminés, produite et sécrétée par la très grande majorité des cellules endocrines et neuroendocrines, contient tels sites de maturation dans son domaine C-terminal. Dans le but d'étudier cette maturation, nous avons construit un virus vaccinia recombinant qui dirige l'expression du 7B2 dans les cellules infectées. L'analyse des formes immunoréactives de 7B2 produites dans diverses lignées cellulaires, montre que celui-ci est synthétisé sous la forme d'un précurseur de 29 kDa, qui est rapidement …
