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Colloque
Le calcium intracellulaire ([Ca++]i) est un messager important dans la transduction des signaux dans les lymphocytes B. La mesure de ce messager est facilitée en cytométrie en flux par le développement d'une sonde très sensible, le fluo-3, qui est excitable dans le visible (488 nm), et qui émet à 525 nm. Son spectre d'excitation ou d'émission ne varie pas après liaison de Ca++, ce qui ne permet pas de maîtriser les variations liées aux concentrations relatives de sondes dans chaque cellule. Pour pallier ce désavantage, on peut théoriquement utiliser le rapport du signal fluo-3 sur celui d'une autre sonde, le …
Colloque
CD9 est une glycoprotéine de moins de 95 kDa, membre de la superfamille des immunoglobulines, présente à la surface des cellules B. Dans l'hypothèse que CD9 pourrait jouer un rôle de "co-récepteur" dans la signalisation des cellules B, nous avons étudié les mécanismes d'action des anticorps anti-CD9 sur l'initiation de la transcription des signaux dans les lymphocytes B humains. Les cellules B des patients correspondent à des stades de maturation des cellules B. Les connexions intracellulaires des cellules B ont été mesurées par cytométrie en flux à l'aide d'un "second messenger" (inositol-3). Les résultats montrent que les anticorps anti-CD9 inhibent …
Colloque
Les développements récents dans le clonage et la culture à long terme des lymphocytes-T périphériques et la découverte de la résistance à la 6-thioguanine des lymphocytes HPRT- rendent maintenant possible l'étude de la mutagénèse humaine in vivo. Pour évaluer l'effet mutagène in vivo d'agents rencontrés en milieu de travail, nous avons isolé des mutants HPRT- chez des infirmiers-res et des pharmaciens-nes travaillant en chimiothérapie. Nous avons entrepris de caractériser l'activité des gènes ainsi obtenus et confirmer l'activité des drogues antinéoplasiques au niveau moléculaire. Après extraction, l'ADN des mutants est digéré par des enzymes de restriction (PstI et HindIII) et les …
Colloque
La seule méthode de surveillance biologique qui permet la récupération des cellules mutantes humaines obtenues in vivo est la méthode de clonage des lymphocytes T mutants au locus hprt. Les lymphocytes isolés du sang total sont ensemencés dans des microplaques en présence de 6-thioguanine pour sélectionner les mutants et en absence d'agent sélectif pour la détermination de l'efficacité de clonage (EC). La FM se calcule comme le rapport de l'EC avec sélection sur l'EC sans sélection. Par cette méthode, nous avons comparé la fréquence des mutants (FM) chez des travailleurs en chimiothérapie de deux hôpitaux ayant des mesures de protection …
Colloque
Les radiations et divers agents chimiques induisent des mutations dans les cellules de mammifères résultant de dommages induits dans l'ADN cellulaire. Tandis que les radiations ionisantes causent des cassures de brins, l'EMS induit plutôt des modifications de base. Ces altérations de la structure de l'ADN peuvent être mises en évidence par l'étude du polymorphisme de restriction des gènes mutés. Afin de développer cette technique dans notre laboratoire, nous avons préalablement déterminé par un essai clonai la mutagénicité induite au locus hprt de lymphoblastes humains par les radiations ionisantes, l'EMS et l'ozone, un oxydant radioimimétique. Les mutants hprt- ont été sélectionnés …
