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Colloque
Les domaines START sont impliqués dans le transport non-vésiculaire de lipides dans le cytoplasme. STARD1 (aussi appelée StAR) ainsi que STARD3-D6 lient spécifiquement le cholestérol. Bien que l’élucidation des rôles exacts de ces protéines soit en cours dans plusieurs laboratoires, STARD1 est bien reconnue pour être impliquée dans la biosynthèse des hormones stéroïdiennes. À ce jour, aucune structure d’un domaine START lié au cholestérol n’a encore été résolue. De plus, le mécanisme de liaison du cholestérol par ces domaines START de même que l’emplacement définitif du site de liaison restent à être démontrés. Dans le but de contribuer à l’avancement …
Colloque
Les protéines à module START (StAR related lipid transfer domain) font partie d’une superfamille présente chez les procaryotes, les bactéries, les plantes et les animaux. Le module START comporte environ 210 acides aminés. On dénombre quinze protéines de mammifères en possédant un. Ces protéines sont distribuées phylogénétiquement en six sous-groupes (3, 4). STARD1 ou StAR (Steroidogenic Acute Regulatory) et D3 du sous-groupe 1 de même que STARD4-D6 du sous-groupe 2 reconnaissent et lient spécifiquement le cholestérol. Bien que la structure cristalline des domaines START de STARD3, D4 et D5 soient connues, la structure de StARD1et StARD6 de même que celle …
Colloque
Au fil des années, beaucoup de travail a été accompli pour comprendre les mécanismes gouvernant le métabolisme des stéroïdes. Malheureusement, plusieurs maladies stéroïdogéniques existent et sont directement reliées à la dysfonction des enzymes responsables du métabolisme des stéroïdes. En particulier, l’hyperplasie lipoïde surrénalienne congénitale a été attribuée à la protéine "steroidogenic acute regulatory" (StAR) portant des mutations qui étouffent sa fonction primaire; StAR est responsable du transport de cholestérol dans les mitochondries permettant la première étape stéroïdogénique enzymatique, transformant le cholestérol en prégnenolone. Plusieurs mutations de la StAR ont été caractérisées, cependant, nous sommes incapables de saisir le mécanisme d’action …
Colloque
La synthèse des stéroïdes dans le cortex surrénalien est médiée par plusieurs cytochromes P450. Une de ces enzymes, le cytochrome P450c17 (P450c17), est responsable de deux activités, la 17alpha-hydroxylation et la 17,20-lyase. Chez l'humain, le produit majeur résultant de ces activités est la déshydroépiandrostérone (DHEA). Contrairement au rat et à la souris, le hamster exprime le P450c17 au niveau surrénalien. Nous avons cloné le P450c17 à partir d'une librairie d'ADNc de surrénale de hamster. Nous avons ensuite exprimé ce clone dans des cellules COS 1 à l'aide du vecteur pSV€SPORT 1. Les cellules ont été incubées en présence de [14C]pregnénolone,[14C]progestérone …
Colloque
La protéine StAR ("Steroidogenic Acute Regulatory Protein") facilite l'apport du cholestérol au cytochrome P450scc ("Side-Chain Cleavage") dans la mitochondrie. Ce dernier transforme le cholestérol en pregnénolone. Cette étape de la synthèse des stéroïdes est considérée par plusieurs auteurs comme étant l'étape limitante de toute la stéroïdogénèse. La protéine StAR a récemment été clonée chez l'humain et la souris. Dans le but de mieux comparer la structure de cette nouvelle protéine, nous avons cloné plusieurs ADNc à partir d'une librairie de surrénales de hamster. Des buvardages de type northern nous démontrent la présence de plusieurs messagers. De plus, une seule injection …
Colloque
Le hamster, contrairement au rat et à la souris, est capable de synthétiser des stéroïdes C19 dans sa surrénale car celle-ci exprime le cytochrome P450c17. Le hamster est donc un excellent modèle pour étudier la stéroïdogenèse surrénalienne car celle-ci reflète mieux ce que l’on retrouve chez l’humain. L’adrénocorticotropine est une hormone hypophysaire qui contrôle la sécrétion des stéroïdes au niveau du cortex surrénalien. Dans le but de mieux étudier l’implication du récepteur dans la sécrétion des stéroïdes surrénaliens, nous avons procédé au clonage de l’ADNc à partir d’une librairie d’ADNc de surrénale de hamster. Pour ce faire, nous avons utilisé …
Colloque
La présence de cortisol dans le plasma du hamster a été établie par spectrométrie de masse. Chez cette espèce, le RNA surrénalien s'hybride à des sondes de cDNA spécifiques au cytochrome P-45017α, P-450c21 et à la cellule de la 3β-hydroxysteroid (3β-HSD) dehydrogenase. Des analyses immunologiques révèlent la présence de bandes protéiques spécifiques au P-45017α, P-450c21 et à la 3β-HSD. L'administration d'adrenocorticotropine chez des hamsters fait augmenter les niveaux à corticosterone l'ARN et de la protéine P-45017α. Un accroissement est observé au niveau des ARN et des protéines du P-450c21 et de la 3β-HSD. Le rapport plasma cortisol/corticosterone augmente suite aux …
Colloque
Le but de ce travail est de vérifier la valeur de la trousse commerciale "INC" pour la mesure du Calcitriol (1-25 (OH)2 D3). Il s'agit d'un radio immuno-essai avec un récepteur thyminque de mouton, spécifique pour le Calcitriol. La méthode se divise en 3 étapes: extraction sur colonne C18, purification sur colonne d'albumine et RIA avec comptage par scintillation liquide. Nous avons étudié 3 groupes (GR) de sujets: 14 normaux (GRI) âgés de 19 à 23 ans, 11 malades avec sarcoïdose (GRII) et 22 urémiques d'un âge moyen 56 ± 3.5 ans, en hémodialyse chronique (GRIII). Tous les paramètres qui …
Colloque
Nous avons étudié les récepteurs de l'aldostérone provenant de reins d'embryons de poulet. Des extraits nucléaires (0.44 M KCl) et du cytosol sont préparés à partir de reins d'embryons âgés de 16 à 20 jours, dans une solution de 0.32 M sucrose, 3 mM KCl, 12 mM monothioglycerol (4°C 10%, glycérine dans le cytosol). Les préparations sont incubées à 4°C pendant 4 heures en présence de 6 nM [3H]aldostérone et de diverses concentrations d'aldostérone. Après séparation des complexes de l'hormone libre, les résultats sont analysés selon la méthode graphique de Scatchard pour la présence de 2 sites de liaison. Notre …
