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Colloque
Des délétions (de 5 à 16 nucléotides) ou des substitutions ont été introduites dans la région 5' terminale du gène du RNA 16S d'E. coli, dans l'opéron rrnB du plasmide pKK3535 ou dans le phagemide pDL4417 (où il est sous contrôle d'un promoteur T7). Les ribosomes ont été extraits de bactéries transformées avec les mutants dérivés de pKK3535 et leur activité de synthèse a été évaluée par une batterie d'essais (synthèse sous la direction de messagers artificiels ou naturels, réponse à des agents qui induisent des erreurs de lecture...). Le RNA 16S a aussi été extrait à partir de mutants …
Colloque
Le RNA 16S de la sous-unité ribosomique 30S d'E. coli est subdivisé en 3 principaux domaines structuraux. À partir d'un plasmide contenant le gène du RNA 16S, nous avons construit un dérivé, pFD34, qui contient une portion du gène du RNA 16S, depuis le début du domaine 3 jusqu'à l'extrémité du gène, directement en aval d'un promoteur T7. La transcription in vitro de ce plasmide linéarisé au site RsaI produit le domaine 3 du RNA 16S. Des études avec diverses sondes chimiques indiquent que ce fragment adopte une conformation semblable à celle qu'il possède à l'intérieur du RNA 16S. Lorsqu'il …
Colloque
Nous avons montré précédemment que la streptomycine (Sm) se lie au RNA 16S de la sous-unité ribosomique 30S d'E. coli, dans la région des bases 892 à 917. Nous avons introduit des délétions dans cette région en utilisant un plasmide construit dans notre laboratoire, pPM112, qui contient le gène codant pour le RNA 16S, directement sous le promoteur pour le phage T7. Les délétions ont été produites dans pPM112 par mutagénèse dirigée à l'aide d'un oligonucleotide synthétique en utilisant le système du phage M13. Nous avons construit 2 plasmides mutés, pMAG10 et pMAG23, qui ont respectivement amputés des bases 896 …
Colloque
Le RNA 16S joue un rôle prépondérant dans le fonctionnement du ribosome bactérien. Nous avons construit un plasmide dérivé de pUC18 (pPM111) contenant, directement en aval d'un promoteur spécifique pour la polymérase T7, la séquence codante pour le RNA 16S. Cette séquence avait été clonée par transgenèse à partir de RNA 16S. Il est possible de transférer efficacement le RNA 16S à partir de pPM111 et ce transcrit, quoique incomplet, peut s'associer avec les protéines ribosomiques pour former des sous-unités 30S. Les sous-unités 30S ainsi reconstituées conservent avec des sous-unités 30S natives la même capacité de polymériser du poly(U) en …
Colloque
Le RNA 16S joue un rôle prépondérant dans le fonctionnement du ribosome bactérien. Nous avons construit un plasmide dérivé de pUC18 (pPM111) contenant, directement en aval d'un promoteur spécifique pour la polymérase T7, la séquence codante pour le RNA 16S. Cette séquence avait été clonée par transgenèse à partir de RNA 16S. Il est possible de transférer efficacement le RNA 16S à partir de pPM111 et ce transcrit, quoique incomplet, peut s'associer avec les protéines ribosomiques pour former des sous-unités 30S. Les sous-unités 30S ainsi reconstituées conservent avec des sous-unités 30S natives la même capacité de polymériser du poly(U) en …
Colloque
La streptomycine, un antibiotique aminoglycoside, a pour cible la sous-unité ribosomique 30S des bactéries. Nous avons radiochimiquement marqué un dérivé tritié de la streptomycine à la sous-unité 30S d'E. coli, à l'aide d'un agent pontant, le phényldiglyoxal. La streptomycine était ajoutée dans un rapport molaire de 2 par sous-unité 30S et le phényldiglyoxal dans un rapport molaire de 1000 par sous-unité 30S. Nous avons observé que la streptomycine lie principalement au RNA ribosomique 16S. Pour caractériser le site de liaison de l'antibiotique, le RNA 16S pointé à la streptomycine a été hybridé à des fragments de DNA codant pour le …
