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Communication
Phex (a phosphate-regulating gene with homologies to endopeptidases on the X chromosome) est exprimée de manière prédominante au niveau de l'os où elle est impliquée dans le procédé de minéralisation. Des mutations de Phex causent l’hypophosphatémie liée au chromosome X, une maladie causant un désordre mendéléen de l’homéostasie du phosphate et un défaut de minéralisation osseuse. Plusieurs facteurs ou hormones, y compris le PTHrP (parathyroid hormone-related protein) régulent la formation, le développement et/ou l’homéostasie des os. Dans les cellules de la lignée UMR-106, le PTHrP(1-34) a causé une diminution dose et temps-dépendant de l'expression de Phex. La forskoline, un activateur …
Colloque
L'endopeptidase neutre-24.11 (EC 3.4.24.11) (EPN) est une métallo-endopeptidase transmembranaire présente dans de nombreux tissus. Elle est particulièrement abondante à la surface apicale de la membrane de la bordure en brosse des tubules rénaux proximaux. Elle s'avère donc être un bon marqueur de surface pour étudier le ciblage des protéines membranaires de ce type de cellules polarisées. Afin de déterminer quel domaine de cette enzyme contient l'information nécessaire à son acheminement vers le domaine apical, nous avons reconstitué un modèle cellulaire de ciblage d'une forme soluble de l'EPN (EPNS) dans la ligne cellulaire polarisée "Madin-Darby Canine Kidney" (MDCK) et ce, à …
Colloque
L'endopeptidase neutre (NEP) est une métallopeptidase à zinc impliquée dans la dégradation de neuropeptides tels que les enképhalines ou d'hormones polypeptidiques comme le facteur atrial natriurétique ou l'endothéline (ANP). Parce qu'elle peut servir de modèle pour la modulation de certaines réponses physiologiques, l'architecture du site actif de la NEP fait l'objet de beaucoup de recherches depuis la dernière décennie. Notamment, c'est par les techniques de génie génétique que notre équipe en 1987 a pu déterminer la structure primaire de la NEP et enfin le lapin. Des études antérieures destinées à déterminer le mécanisme catalytique de l'enzyme ont démontré la présence …
Colloque
L'EPN est un ectoenzyme membranaire impliqué dans la dégradation de nombreux peptides. Nous poursuivons une série d'études visant à cerner les structures nécessaires au transport intracellulaire de la protéine et son activité enzymatique. L'EPN étant une glycoprotéine, comme la majorité des protéines membranaires, l'ADNc a été modifié par mutagenèse dirigée afin d'éliminer progressivement les 5 sites potentiels de glycosylation par les asparagines et les glutamines. L'utilisation d'un promoteur eucaryote a ensuite permis l'expression des protéines mutantes ont été examinées par électrophorèse et immunoprécipité à l'aide d'anticorps spécifiques. Le rapport entre les sites de glycosylation et l'activité entraîne une rétention graduelle …
Colloque
L'endopeptidase neutre (EC 3.4.24.11, EPN) est une métallopeptidase à zinc ancrée dans la membrane plasmique de nombreux types cellulaires. L'enzyme est impliquée dans la dégradation des peptides biologiquement actifs et en particulier des enképhalines et du facteur natriurétique de l'oreillette. Cette enzyme est donc la cible pour la synthèse d'inhibiteurs qui pourraient être utilisés comme nouveaux agents analgésiques ou anti-hypertenseurs. De façon à définir la structure du site actif de l'enzyme nous avons utilisé la technique de mutagénèse dirigée pour identifier les acides aminés impliqués dans la coordination du zinc, la liaison du substrat et le mécanisme catalytique. D'autre part, …
Colloque
L'endopéptidase neutre se compose d'un domaine extracellulaire, incluant le site actif de l'enzyme, retenu à la membrane par un domaine transmembranaire servant aussi de peptide signal. Nous avons voulu déterminer si ce type de protéine peut devenir sécrétée en remplaçant le signal/ancrage par un peptide signal de protéine sécrétée. Les séquences ADNc codant pour le domaine extracellulaire ont été fusionnées à celles du peptide signal d'une protéine sécrétée (pro-opiomélanocortine). L'ADN recombinant obtenu a été exprimé transitoirement dans les cellules COS-1 en utilisant le promoteur du virus SV40. La protéine a été ensuite été analysée sur gel de SDS-polyacrylamide et immunodétection. …
Colloque
Le mécanisme moléculaire impliqué dans le ciblage des neuropeptides vers les granules de sécrétion se réalise probablement par l'intermédiaire d'un "signal" présent sur la protéine. Notre étude consiste à localiser ce "signal" sur la structure protéique de la Pro-opiomélanocortine (POMC). Plusieurs formes tronquées du précurseur POMC ont été produites par mutagénèse dirigée de l'ADNc de la POMC. Les ADNc modifiés ont été exprimés dans une lignée neuroendocrine (Neuro 2A) par l'entremise d'un vecteur rétroviral. Des analyses par immunohistochimie de même que des essais de stimulation de la sécrétion nous permettent de visualiser la localisation intracellulaire des neuropeptides et de vérifier …
Colloque
Le RNA 16S joue un rôle prépondérant dans le fonctionnement du ribosome bactérien. Nous avons construit un plasmide dérivé de pUC18 (pPM111) contenant, directement en aval d'un promoteur spécifique pour la polymérase T7, la séquence codante pour le RNA 16S. Cette séquence avait été clonée par transgenèse à partir de RNA 16S. Il est possible de transférer efficacement le RNA 16S à partir de pPM111 et ce transcrit, quoique incomplet, peut s'associer avec les protéines ribosomiques pour former des sous-unités 30S. Les sous-unités 30S ainsi reconstituées conservent avec des sous-unités 30S natives la même capacité de polymériser du poly(U) en …
Colloque
Plusieurs évidences suggèrent que la régulation de l'expression des gènes pourrait avoir lieu, en partie, au niveau de la traduction. Ce phénomène impliquerait une compétition entre les divers tRNAs cellulaires, pour une composante limitante, nécessaire à la formation du complexe d'initiation de la synthèse protéique. La structure des tRNAs serait considérée comme un des facteurs discriminatoires, influençant la compétition et expliquant les diverses efficacités de traduction des mRNAs. Notre étude consiste donc à vérifier cette hypothèse. En prenant comme modèle, la structure secondaire, de la région 5' non codante, du tRNA de la propionyladenosine. Les techniques de biologie moléculaire nous …
Colloque
Plusieurs indices suggèrent que le RNA ribosomique joue un rôle prépondérant dans le fonctionnement du ribosome bactérien. Pour le préciser mieux, il serait important de pouvoir sélectionner des ribosomes ribosomiques bactériens où la séquence du RNA est modifiée. Toutefois, la redondance des gènes codant pour le RNA ribosomique ne permet pas de recourir à la mutagénèse classique pour obtenir de tels mutants. Nous avons développé une stratégie basée sur les méthodes de génétique pour obtenir des mutants où le RNA est modifié. Notre approche comprend les étapes suivantes: (a) synthèse d'un cDNA par copie du RNA ribosomique, 16S ou 23S; …
