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Colloque
La protéine autofluorescente (AFP) isolée de la méduse Aequoria victoria possède des propriétés qui en font le meilleur système de marquage de protéines recombinantes. Cette méthode ne nécessite pas l'utilisation de composés radioactifs ni de co-substrats et permet le suivi de l'expression génique dans des cellules vivantes. Sa structure très stable fait en sorte que cette protéine demeure fonctionnelle dans tous les systèmes biologiques testés à ce jour. Nous décrivons de nouveaux mutants de l'AFP qui montrent un niveau de fluorescence supérieur ainsi que des propriétés spectrales particulières. Ces nouvelles AFPs mutantes peuvent notamment être utilisées pour étudier la localisation …
Colloque
Le facteur de transcription GATA-1 est une protéine liant l'ADN qui est essentielle au développement des érythrocytes. Quand certains de ces domaines de type "zinc finger" sont exprimés dans une cellule bactérienne à l'aide d'un système inductible, la croissance des cellules bactériennes qui possèdent ces domaines de liaison à l'ADN est rapidement inhibée. Ce système d'induction de la toxicité est le principe utilisé dans le système de sélection positive QuanToxTM. Des fragments d'ADN clonés dans le vecteur inactivent la production du domaine de GATA-1 qui est toxique pour les cellules bactériennes et font en sorte que seuls les vecteurs ayant …
Colloque
Le système d'expression Adénovirus/cellules humaines est similaire aux systèmes d'expression Baculovirus/cellules d'insectes. Il peut produire des protéines recombinantes à des niveaux équivalents et le principe d'utilisation est le même. L'avantage majeur des systèmes Adénovirus est qu'ils peuvent infecter la majorité des différentes cellules humaines et ce autant in vivo que in vitro. Étant donné que l'expression se produit dans des cellules humaines, ce système d'expression produit des protéines humaines ou des protéines de mammifères qui possèdent une activité équivalente à l'activité des protéines natives. Nous présentons un système d'expression Adénovirus auquel a été ajoutée la coexpression de protéines autofluorescentes (AFPs). …
Colloque
Le gène hēma code pour l'enzyme responsable de la synthèse de l'acide 5-aminolévulinique qui est le premier intermédiaire de la voie de biosynthèse des porphyrines. Par hybridation avec une sonde du gène hēma d'Escherichia coli K12, nous avons identifié un fragment Hind III de 7,35 kb de Salmonella typhimurium qui porte le gène hēma. Nous avons ensuite localisé ce gène sur un fragment AvaI de 1,6 kb. Le sous-clonage de différentes portions de ce fragment dans le vecteur pKO1 nous a permis de circonscrire la région promoteur. Nous sommes en train de séquencer le fragment pour déterminer afin d'identifier plus …
Colloque
Le gène hēma code pour l'enzyme responsable de la synthèse de l'acide 5-aminolévulinique qui est le premier intermédiaire de la voie de biosynthèse des porphyrines. Par hybridation avec une sonde du gène hēma d'Escherichia coli K12, nous avons identifié un fragment Hind III de 7,35 kb de Salmonella typhimurium qui porte le gène hēma. Nous avons ensuite localisé ce gène sur un fragment AvaI de 1,6 kb. Le sous-clonage de différentes portions de ce fragment dans le vecteur pKO1 nous a permis de circonscrire la région promoteur. Nous sommes en train de séquencer le fragment pour déterminer afin d'identifier plus …
Colloque
Le gène hēma code pour l'enzyme responsable de la synthèse de l'acide 5-aminolévulinique qui est le premier intermédiaire de la voie de biosynthèse des porphyrines. Par hybridation avec une sonde du gène hēma d'Escherichia coli K12, nous avons identifié un fragment Hind III de 7,35 kb de Salmonella typhimurium qui porte le gène hēma. Nous avons ensuite localisé ce gène sur un fragment AvaI de 1,6 kb. Le sous-clonage de différentes portions de ce fragment dans le vecteur pKO1 nous a permis de circonscrire la région promoteur. Nous sommes en train de séquencer le fragment pour déterminer afin d'identifier plus …
Colloque
La dégradation bactérienne du 4-chlorophényle (4CB) nécessite deux ensembles de gènes distincts. Un premier qui convertit le 4CB en 4CBA et un second qui minéralise le 4CBA. Afin de cloner les gènes de Pseudomonas sp. CBS-3 spécifiant la dégradation du 4CBA, nous avons d'abord construit un cosmid à large spectre d'hôte, pPSB42A, vecteur dérivé des plasmides pTC9 et RSF1010. Les sites uniques de restriction sont BamHI, ClaI, HindIII, SalI et SstI. Ce vecteur est amplifiable au chloramphénicol chez E. coli et est mobilisé efficacement vers Pseudomonas sp. CBS-3. Le cosmid pPSB42A avec la banque de gènes de Pseudomonas CBS-3 a …
Colloque
Le gène hemA code pour l'enzyme responsable de la synthèse de l'acide 5-aminolévulinique (5-ALA), le premier intermédiaire de la voie des porphyrines. Les principaux mécanismes de contrôle de cette voie s'exercent au niveau de la synthèse de 5-ALA, d'où l'intérêt pour l'étude du gène hemA. Dans le but d'élucider la régulation de la voie des porphyrines chez E. coli K12, nous avons cloné précédemment le gène hemA sur un fragment d'environ 2.5 kb. Nous présentons ici une carte physique détaillée de la région hemA de E. coli K12. Les fragments transcrits de ce gène ont été redéfinis dans un vecteur …
Colloque
La dégradation bactérienne du 4-chlorophénylène (4CB) nécessite deux ensembles de gènes distincts. Un premier qui convertit le 4CB en 4-chlorobenzoate (4CBA), et un second qui minéralise le 4CBA. Il n'existe aucune souche naturelle possédant à la fois ces deux ensembles de gènes. Le but ultime du présent projet est d'obtenir une souche bactérienne minéralisant complètement le 4CB. Dans une première étape, nous voulons cloner le gène de la 4-chlorobenzoate 4-hydroxylase de Pseudomonas sp. CBS-3. Cette enzyme catalyse l'oxydation du noyau benzénique pour générer le 4-hydroxybenzoate. Ce dernier composé est facilement dégradé par plusieurs souches bactériennes. Le clonage de la 4-chlorobenzoate …
Colloque
Les porphyrines sont des constituantes de base des organismes vivants. Leurs dérivés jouent un rôle essentiel dans des processus fondamentaux tels la photosynthèse, la respiration, la synthèse des acides nucléiques, etc. La première étape dans la biosynthèse des porphyrines est la synthèse de l'acide 5-aminolévulinique (5-ALA). Cette synthèse est effectuée par la 5-ALA synthase (5-ALAS) qui est codée par le gène hemA. Ainsi, le gène hemA est responsable de la synthèse du premier intermédiaire des voies métaboliques qui conduisent à la chlorophylle, l'hème, la vitamine B12 etc. Il est donc évident que les principaux mécanismes de régulations de voies respectives …
