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Colloque
Nos résultats précédents ont montré que les protéines virales stimulaient les cellules NK et les macrophages. Par contre, nous démontrons que les PMNL, une autre composante importante du mécanisme de résistance non-spécifique (NSRM) peuvent être stimulés par les protéines virales. Des souris C3H/HeN sont inoculées par voie intra-péritonéale avec la cafféine de sodium. Après 18 h, les PMNL sont prélevées, purifiées et testées pour la sécrétion de H2O2 (in vitro) ce dernier est évalué par l'oxydation du phénol rouge en présence de peroxydase. La production de H2O2 (nanomole/mg/h) pour le virus A/USSR/90/77) inactivé est égale à 2.02, suivi par l'hémagglutinine …
Colloque
La neuraminidase (NA), une glycoprotéine du virus grippal, possède le potentiel d'activer certaines propriétés des macrophages (MØ) murins telles que la sécrétion d'interleukine 1 (IL 1). L'effet d'un adjuvant synthétique, le stearyl tyrosine (ST), sur cette activation par le NA a été étudié. NA a été purifiée par électrophorèse SDS-PAGE à partir de la souche A/USSR/90/77 (H1N1), inactivée par chauffage Na:ST de 21:3,9 hpg à 5,5°C puis inoculée à des souris C3H/HeN. Les MØ péritonéaux furent récupérés 72 heures plus tard et testés pour leur sécrétion d'IL 1 lors d'une stimulation in vitro par l'antigène NA. L'inoculation de NA seul …
Colloque
Nos résultats précédents ont montré que la neuraminidase (NA), une glycoprotéine de surface du virus grippal, stimulait in vivo l'activité des cellules Natural Killer (NK) murines. Nous avons ensuite voulu étudier l'effet de NA sur la stimulation in vivo des macrophages, cellules constituant la première ligne de défense de l'organisme contre l'infection. Les macrophages péritonéaux (MP) de souris C3H inoculées par voie intrapéritonéale avec NA ont été prélevés quatre jours après inoculation. Ces MP ont ensuite été incubés pour leur sécrétion de H2O2 en présence de phorbol myristate acétate, cette réponse étant reconnue comme un indice de l'activation des macrophages. …
Colloque
Les résultats obtenus dans notre laboratoire ont démontré que la neuraminidase (NA) stimule in vitro et in vivo l'activité des cellules NK humaine et murines. Dans le but de déterminer la région de la NA comportant les épitopes reconnus par les cellules NK, la NA a été soumise à une fragmentation chimique. Le fragment A/USSR/90/77 (H1N1), purifié dépourvu d'activité enzymatique, retient son potentiel à stimuler l'activité NK, en pourcentage de lyse de 33,6 + 0,6 comparé à 29,8 + 0,3 pour le virus intact. Des souris ayant reçu par traitement ce nouveau fragment ont montré une augmentation de l'activité NK …
Colloque
De récents travaux nous ont permis d'observer une stimulation in vivo de l'activité cytotoxique des cellules Natural Killer (NK) murines (lignées BALB/c et C3H) par la neuraminidase grippale N1. La stimulation de cette dernière est similaire par l'autre glycoprotéine grippale, l'hémagglutinine (HA), qui a été évaluée. HA a été purifiée à partir de la souche recombinante A/USSR/90/77 x A/Prague/1/56 (N7) puis inoculée par voie intraveineuse à des souris BALB/c. Après 24 heures, les splénocytes ont été prélevés, purifiés puis l'activité NK a été mesurée dans un test de relargage de 51Cr en utilisant des cellules YAC-1 comme cellules cibles. Aux …
Colloque
L'activité NK est impliquée dans la protection initiale contre une infection virale. Nous avons déjà rapporté que les cellules NK humaines peuvent être stimulées par les protéines de surface, par un mécanisme de stimulation indépendant de la synthèse de novo de l'ARN. Nous examinons ici si différentes neuraminidases (NA) partagent un même site de stimulation de l'activité NK. Les protéines NA (N1, N2, et N7) ont été isolées, et testées pour leur stimulation NK. Des lymphocytes au sang périphérique des donneurs normaux ont été exposés des concentrations variables (12 x 10^4 à 12 x 10^6 µg/ml) d'antigène et ajoutés à …
Colloque
Nous rendons compte de la stimulation de l'activité NK par différents sous-types de neuraminidase (NA) du virus influenza A humain. Les protéines NA (N1 et N2) étaient isolées des souches A/USSR/90/77 (H1N1) et A/Aichi/2/68 (H3N2) en traitant le virus avec du SDS, séparées par électrophorèse sur polyacrylamide et colorées. Par la suite, purifiées par chromatographie d'affinité. Des lymphocytes du sang périphérique de donneurs sains humains furent exposés à des concentrations variables (12 x 10-4 à 12 x 10-2 µg/ml) d'antigène, et ajoutés à des cellules cibles K562, radiomarquées au sodium chromate, pour le test cytotoxique. Les résultats préliminaires ont démontré …
Colloque
Le virus grippal A/Alchi/2/68(H3N2) possède en plus de la neuraminidase (NA) une protéine douée des activités hémagglutinante et neuraminidasique (HANA). Leurs caractéristiques biochimiques sont les suivantes: après leur isolement du virus et purification par électrophorèse sur papier acétate de cellulose suivie d'une chromatographie d'affinité, la HANA donne une bande sur électrophorèse sur gel d'acrylamide et de SDS; la densité du gradient de chlorure de césium est de 1,288 g/cm3 comparativement à 1,261 g/cm3 pour la NA. Le pH optimal de la HANA et de NA est de 4,5 et 5,5. Les ions calcium stimulent leur activité et l'EDTA l'inhibe, mais …
Colloque
Les cellules Natural Killer (NK) sont des lymphocytes du sang périphérique qui sont normalement présents chez les individus non-infectés. Dans la plupart des études portant sur la stimulation virale de l'activité cytotoxique médiée par ces cellules, ce sont les souris BALB/c qui sont les plus couramment utilisées. Nous avons développé un modèle expérimental in vivo pour la stimulation de cette réponse par le virus influenza. Ce modèle compare le niveau de l'activité NK de quatre souches de souris consanguines (C3H, BALB/c, C57BL/6 et DBA/2) après stimulation par le virus influenza. Les deux souches virales utilisées (A/Aichi/2/68 (H3N2) et A/USSR/92/77 (H1N1)) …
Colloque
Dans le but de trouver la meilleure réponse immunogénique aux protéines du virus influenza, différentes races de souris ont été testées avec de l'hémagglutinine seule et complexée à des lipides. L'hémagglutinine (H1) a été purifiée à partir du virus recombinant A/USSR/92/77 (H1) x A/Prague/1/56 (Neq1) par traitement du virus au Nonidet P-40 et centrifugation sur gradient de sucrose, suivie d'une chromatographie d'affinité sur colonne de sépharose-gly-gly-tyr-NAPOA. L'hémagglutinine (5 µg) et l'hémagglutinine complexée à des lipides a ensuite été administrée, par voie intra-veineuse, à quatre races de souris, C3H, CDI, CFI et Babl/c. Sept jours après la première injection, une deuxième …
