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Colloque
La présence d'histones a été observée dans le compartiment extranucléaire des lymphocytes et des monocytes activés mais l'origine de ces histones présentes à la surface cellulaire ou dans le milieu extracellulaire demeure inconnue. Récemment, nous avons démontré dans les macrophages (MA) alvéolaires de rat activés avec le lipopolysaccharide (LPS), la présence d'un ARN messager (ARNm) polyadénylé pour l'histone H4. La présence de cette forme variante d'ARNm polyadénylé soulève la possibilité que les MA puissent produire l'histone H4 et/ou des fragments peptidiques de H4 ayant principalement une localisation et une fonction extranucléaire. De manière à vérifier ceci, nous avons analysé la …
Colloque
L'histogranine est un pentadécapeptide isolé de la médullo-surrénale reconnu pour bloquer les convulsions chez la souris induites par l'acide aminé excitateur N-méthyl-D-aspartate. L'étude présente fut initiée à partir de l'observation par Sagen et. al. (Neuroreport 8: 1379, 1997; Brain Res. 755: 331, 1997) que l'histogranine est capable de bloquer la douleur dans le test de formaline chez le rat de même que l'hyperalgésie induite par la ligature du nerf sciatique. Le but de cette recherche est de vérifier si l'histogranine est capable de bloquer d'autres types de douleur chez la souris à savoir la douleur chimique induite par l'injection intrapéritonéale …
Colloque
La nociceptine est un heptadécapeptide possédant une haute affinité pour le récepteur ORL1 qui appartient à la superfamille des récepteurs couplés aux protéines G. L'homologie structurale entre la nociceptine et la dynorphine A (Dyn A) et le fait que le récepteur ORL1 et le site non-opiacé de la Dyn soient sensibles à la Dyn A et non aux ligands sélectifs des récepteurs opiacés mu, delta et kappa suggèrent que la nociceptine et la Dyn A interagissent avec un récepteur commun. Dans la présente étude, les paramètres de liaison de la [3H]nociceptine sont examinés dans des préparations membranaires de cœur de …
Colloque
Nous avons déjà démontré que la modification du lien peptidique normal (CO-NH) par un lien thiopeptidique (CS-NH) entre les positions 6 et 7 d'un analogue de la dynorphine A-(1-9) (Dyn A-(1-9)) produit un analgésique puissant avec peu ou pas d'effet moteur secondaire. L'analgésie causée par le [Leu6,6psi7(CS-NH),D-Leu8]Dyn A-(1-9) (THIODYN1) est très prolongée et n'est pas bloquée par le naloxone, un antagoniste opiacé. Il semble que l'activité analgésique de ce composé implique le récepteur NMDA. Dans la présente étude, nous avons synthétisé quatre thioanalogues de la THIODYN1 : Des-Tyr (THIODYN2); Des-Tyr-Gly (THIODYN3); Des-Tyr-Gly-Gly (THIODYN4), THIODYN1 amide (THIODYN5). Les thioanalogues ont été …
Colloque
Les histones sont des protéines retrouvées au niveau des chromatines et sont impliquées dans le mécanisme de la réplication de l'ADN dans le noyau. Une des caractéristiques importante et unique à l'histone H4 au niveau de l'ARNm est l'absence de la queue de Poly A. Récemment, l'isolation d'une séquence d'un variant polyadénylé de l'histone H4 nommé H4-v.1 a été réalisé chez le bœuf au niveau de la surrénale. Ces observations nous indiquent que certaines formes d'histones H4 (variantes) pourraient donc avoir un rôle et une action extranucléaire. Présentement, nous tentons d'isoler la séquence de ce variant auprès du rat dans …
Colloque
La concentration des peptides de type "bombésine" a été mesurée dans des extraits acides de médullo-surrénale de bœuf à l'aide d'un anticorps spécifique à la bombésine synthétique. Des quantités relativement grandes d'activité immunoréactive (27.3 pmoles/g) ont été décelées dans ce tissu. Le matériel immunoréactif a été d'abord purifié par chromatographies successives sur SP-2PW, C18, SP-5PW (préparatif et analytique) suivi d'une chromatographie à phase inversée sur une colonne n-Bondapak C18. Cette dernière étape a donné lieu à 3 pics d'immunoréactivité, 3 d'entre eux correspondant à la bombésine, à la neuromédine C, de la neuromédine et du GRP, respectivement. Le matériel immunoréactif …
Colloque
Il a déjà été démontré que de la dynorphine immunoréactive (ir-Dyn) est présente dans le placenta humain. Ce peptide opioïde semble jouer un rôle modulateur important dans le contrôle neurométocrinologique de la sécrétion de certaines hormones. Il est donc important d'identifier les formes moléculaires de ce peptide dans l'utéro-placenta. Pour ce faire, un extrait acide (HCl) du placenta a été passé sur Sep Pak C18, puis sur colonne d'affinité (35s). L'ultra filtrat a été séparé par HPLC ("High Performance Liquid Chromatography") sur une colonne échangeuse de cations (SP-5PW). Le matériel ir-Dyn, a ensuite été séparé sur une colonne analytique également …
Colloque
La digestion peptique de l'1-caséine, protéine majeure du lait, produit des exorphines (morphinomimétiques), dont la plus active correspond à sa séquence 90-96: Arg-Tyr-Leu-Tyr-Leu-Glu. La découverte de séquences antagonistes des exorphines, basée sur cette séquence nous a conduit à l'introduction dans la partie N-terminale de la Dynorphine (Dyn-A-(1-13)), 3 sites de coupure peptidique. Le criblage des analogues fut effectué: (1) [D-Leu]-Dyn-A-(1-13), (2) [Tyr-1]-Dyn-A-(1-13), (3) [D-Leu6]-Tyr-1-Dyn-A-(1-13), (4) [Arg-1]-Tyr-1-Dyn-A-(1-13) et (5) [D-Leu7]-Tyr-1-Dyn-A-(1-13). Leur composition en acides aminés de type 1'analyse par HPLC (Zorbax C18) révèle leur identité et leur pureté à plus de 95%. L'analyse de l'activité biologique de ces composés par l'essai …
Colloque
Des niveaux élevés de dynorphine immunoréactive (Dyn-ir) et de leucine-enképhaline-ir (Leu-Enk-ir) sont retrouvés dans des extraits acides de granules chromaffines isolés de la médullo-surrénale de boeuf. L'analyse chromatographique par HPLC ("High Performance Liquid Chromatography") sur une colonne de type TSK G3000SW révèle la présence de plusieurs formes moléculaires de Dyn-ir (64,000, 38,000, 11,000 et < 4000 daltons) et de Leu-Enk-ir (11,000 et < 600 daltons). Après élution de la colonne, l'inoculation de chacune des fractions en présence d'acétylcholinestérase (1 mg/ml) pendant 6h produit une augmentation de l'activité de Dyn-ir des temps d'élution correspondant à 64,000 et 38,000. De même, l'activité …
Colloque
Une méthode manuelle de dégradation d'Edman combinée à la chromatographie liquide à haute performance (HPLC) est proposée. La réaction de couplage entre le phenylisothiocyanate (PITC) et le résidu en N-terminal du peptide a lieu dans un tampon de diméthylallylamine (pH 9,5) à 56°C pendant 30 min. On élimine les excès de réactif et les produits secondaires avec le 1-cl-butane, ceci en maintenant les pertes de peptide à cette étape. L'utilisation de HCl 12 N pour cliver l'acide aminé en N-terminal réduit l'accumulation de sels observée avec l'acide trifluoroacétique. Ceci nous permet de séquencer un plus grand nombre de résidus dans …
