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Colloque
Les protéines membranaires intrinsèques ne peuvent généralement être purifiées qu'en présence de détergent. Dans beaucoup d'analyses, il est nécessaire d'éliminer ce détergent une fois la protéine purifiée. La méthode généralement utilisée est la dialyse d'au moins 48 heures. L'utilisation du lauryl-sucrose permet de raccourcir cette opération : le lauryl-sucrose est un ester d'acide laurique et de sucrose. C'est un détergent doux qui ne dénature pas les protéines, même les plus fragiles. De plus, sous l'action d'esterases et de lipases, ou dans des conditions alcalines (pH>10), il s'hydrolyse quantitativement. Lorsque la rhodopsine bovine ou la bactériorhodopsine purifiées dans le lauryl-sucrose, il …
Colloque
La procédure couramment utilisée pour purifier des segments externes de bâtonnets (SEB) à partir de rétines bovines consiste en des flottations répétées des SEB sur une solution de sucrose (40% p/v). On admet généralement que les SEB sont purs quand leur spectre d'absorption ne laisse plus paraître d'autres bandes que celles qui sont attribuées à la rhodopsine. Cette méthode ne donne cependant pas des préparations homogènes. En effet, de telles préparations se résolvent en au moins trois bandes quand elles sont sédimentées dans des gradients de densité continu et discontinu. La pureté spectrale, le rapport phospholipide/rhodopsine et la composition en …
Colloque
La bactériorhodopsine est la seule composante protéique de la membrane pourpre de Halobacterium halobium. Cette protéine est le siège de l'activité photochimique responsable de la création d'un gradient de protons à travers la membrane. Nous nous intéressons à la purification de cette protéine dans le but de l'incorporer et d'analyser son comportement dans des membranes modèles. La plupart des détergents utilisés dans la purification des protéines membranaires dénaturent irréversiblement et rapidement la bactériorhodopsine. Ce n'est toutefois pas le cas lorsque la membrane pourpre est solubilisée par l'ester de sucrose et d'acide laurique (L-1690). Cependant, nos mesures spectrales ne nous permettent …
Colloque
Suite à une excitation lumineuse, la rhodopsine, protéine membranaire de la rétine de l'œil, présente une séquence d'intermédiaires différentiables spectralement et thermiquement. Le but que nous poursuivons est de déterminer les paramètres environnementaux (composition lipidique ou autre) qui favorisent le mécanisme de transition d'un intermédiaire positif entre les stades métarhodopsine I et métarhodopsine II. Dans un premier temps, notre étude porte sur des températures de transition des intermédiaires de la rhodopsine dans différents environnements moléculaires comme la membrane des segments externes des bâtonnets ou les détergents. Pour la protéine solubilisée dans les détergents (L-1690 et Ammonyx LO), la rigidité micellaire …
Colloque
La présence de détergent dans les préparations de protéines membranaires complique beaucoup leur incorporation dans des membranes modèles. Dans le cas des suspensions de rhodopsines bovine, l'application des techniques physico-chimiques généralement utilisées pour retirer le détergent ne donne pas toujours des résultats satisfaisants. Dans le but d'obtenir de la rhodopsine apte à s'incorporer dans des modèles, nous avons obtenu une hydrolyse enzymatique du détergent. Un mélange d'esterase et de lipase est utilisé pour digérer le complexe rhodopsine-LM-1690. De cette manière, le détergent est quantitativement éliminé et la protéine retient ses propriétés spectrales natives.
Colloque
Nous avons déjà montré que l'activité du centre photochimique isolé de Rhodospirillum rubrum entraînait la formation de radicaux superoxyde. Dans le but de déterminer la nature de l'intermédiaire responsable de la réduction de l'oxygène moléculaire en superoxyde, nous avons comparé les cinétiques d'apparition du superoxyde avec les cinétiques de réoxydation de l'accepteur primaire. L'analyse de ces mesures dans des préparations avec et sans ubiquinone a révélé que l'oxygène moléculaire est réduit au niveau de A-430, une semi-ubiquinone, agissant comme accepteur primaire, et que le réservoir d'accepteurs secondaires ne participe pas à la formation des radicaux superoxyde.
Colloque
Nous avons déjà montré que l'activité du centre photochimique isolé de Rhodospirillum rubrum entraînait la formation de radicaux superoxyde. Dans le but de déterminer la nature de l'intermédiaire responsable de la réduction de l'oxygène moléculaire en superoxyde, nous avons comparé les cinétiques d'apparition du superoxyde avec les cinétiques de réoxydation de l'accepteur primaire. L'analyse de ces mesures dans des préparations avec et sans ubiquinone a révélé que l'oxygène moléculaire est réduit au niveau de A-430, une semi-ubiquinone, agissant comme accepteur primaire, et que le réservoir d'accepteurs secondaires ne participe pas à la formation des radicaux superoxyde.
Colloque
Le centre photochimique isolé de la souche sauvage de R. rubrum contient une molécule de spirilloxanthine par équivalent de donneur primaire d'électrons (P870). Celui qu'on isole de la souche G9 a la même constitution pigmentaire en ce qui a trait à la bactériochlorophylle et à la bactériophéophytine, mais il est dépourvu de caroténoïde. L'utilisation de sondes telles que l'adrénaline et le diphényl-isobenzofuranne a montré que l'oxygène singulet est principalement responsable des dommages photodynamiques importants observés avec le centre photochimique de la souche G9. Cependant, ce dernier peut être protégé à différents degrés contre ces dommages photodynamiques en lui fixant différents …
Colloque
On a isolé, des chromatophores de Rhodospirillum rubrum, un complexe chromoprotéique responsable de la séparation de charges, étape primaire de la photosynthèse. Plusieurs propriétés de ce complexe montrent une dépendance marquée vis à vis de la température. Entre autre, le spectre d'absorption, l'état photoionisation et la cinétique de décoloration à la lumière sont des fonctions de la température. Ces résultats nous ont amené à utiliser des sauts de température rapides (50μ) comme technique de perturbation du système (P + accepteurs). Le spectre de relaxation obtenu par ces sauts de température sera discuté.
Colloque
Afin de reconstituer l'état naturel d'agrégation des pigments visuels, on a préparé, à l'interface air-eau, des couches monomoléculaires d'isomères cis et trans du rétinol, du rétinal, et de l'acétate de rétinol. Les isothermes d'adsorption ont été mesurés, et les aires limites du trans-rétinol, de l'acétate de rétinol, du 13-cis et du trans-rétinal, ont été trouvées respectivement égales à 46.0, 44.0, 46.5 et 61.0 2 par molécule. A l'aide de la technique de Blodgett-Langmuir, les monocouches ont été transférées sur un substrat solide, afin de déterminer leurs propriétés spectroscopiques. Les spectres d'absorption des pigments visuels en phase liquide et en couche …
