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Colloque
L'administration chronique d'urécholine à des rats (12 mg/kg/jour, i.p.) produit après 14 jours de traitement une diminution (4×) de la sensibilité des acini pancréatiques dans leur capacité à libérer l'amylase en présence de carbamylcholine. Ce changement de sensibilité est accompagné d'une perte (42%) du nombre de récepteurs muscariniques évalué par la liaison spécifique de (3H)-phényl scopolamine sur une suspension d'acini pancréatiques. Toutefois, la constante de dissociation (Kₚ) du récepteur muscarinique pour le ligand (0.17 nM) n'est pas modifiée par le traitement. L'analyse de la liaison de carbamylcholine aux récepteurs muscariniques des acini, en termes de deux classes de sites de …
Colloque
Ces expériences furent réalisées afin de caractériser la désensibilisation à court terme de la réponse sécrétoire du pancréas à un agoniste cholinergique. Des acini pancréatiques furent donc préincubés pour 1 h avec ou sans carbachol 10⁻⁷, 3 × 10⁻⁵ et 10⁻⁴ M, lavés puis resuspendus dans un milieu d'incubation pour 15 min en présence de carbachol (10⁻⁸ à 10⁻³ M). À la fin de cette période, nous avons mesuré la sécrétion d'amylase. La préincubation d'une heure en présence de l'agoniste n'a pas changé la réponse maximale au carbachol durant la 2ème incubation. Cependant, la courbe dose-réponse au carbachol fut déplacée …
Colloque
Les protéines nucléaires poly (ADP-ribosylées) et certaines protéines phosphorylées sont instables à pH basique et à haute température. À pH 6.8 et à la température de la pièce, une perte de 25% de polymère attaché à l'histone H1, qui est l'accepteur principal de la poly (ADP-ribosylation), est notée après 6 heures. À 1000°C et pH 6.8, une perte immédiate de 20% est notée. Les méthodes d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de SDS sont utilisées à pH neutre ou basique. Nous avons développé une nouvelle méthode d'électrophorèse sur gel à pH 2.4 et à 40°C en remplaçant le dodécyl …
Colloque
Les protéines HMG (High Mobility Group) sont des nucléoprotéines dans la classe des non-histones et caractérisées par une haute teneur en acides aminés acides (20-30%) et basiques (25-30%). La poly (ADP-ribosylation) des histones est bien connue chez les différentes espèces incluant les végétaux; par contre la poly (ADP-ribosylation) des HMG est peu connue. Nos travaux sur la poly (ADP-ribosylation) des protéines HMG montrent que seules trois types de HMG (1, 14 et 17) sur quatre types (1, 2, 14 et 17) connus sont modifiées dans les noyaux du pancréas de rat in vivo. La longueur du polymère attaché aux protéines …
Colloque
La poly (ADP-ribose) polymérase est une enzyme nucléaire catalysant, à partir de NAD+, la polymérisation successive des résidus d'ADP-ribose en polymères de poly (ADP-ribose) et leur liaison covalente à plusieurs protéines chromosomales dont les histones. Nous avons isolé des nucléosomes de complexités diverses grâce à des digestions limitées chromatine partagée par la nucléase micrococcale et nous avons observé que l'activité maximale de la poly (ADP-ribose) polymérase se localise dans les tri- et tétranucléosomes alors que l'enzyme semblait décroître en activité vers les dinucléotides et le nucléosome. Nous avons analysé la modification des histones et il fut observé que seule l'histone …
Colloque
Les cellules alvéolaires libres des poumons de rats sont isolées par lavage bronchoalvéolaire à l'aide d'une solution balancée de Hank's modifiée (sans Mg²⁺ et Ca²⁺). La population de cellules ainsi obtenue est constituée à 90-95% de macrophages viables (exclusion du Trypan bleu). Les macrophages (MQ) sont perméabilisés à l'aide d'un tampon contenant Triton-X100 à 0.05%. Les conditions optimales de l'activité poly (ADP-ribose) polymérase furent établies en incubant les MQ perméabilisés en présence de substrat (NAD³²P). La réaction enzymatique est arrêtée par précipitation au TCA (15%). A 30°C, l'enzyme possède un pH optimum de 8 et est activée par les ions …
Colloque
Des travaux ont été entrepris afin de déterminer l'implication de la poly (ADP-ribose) polymérase dans la régénération pancréatique. En effet, les noyaux de pancréas de rat possèdent une enzyme, la poly (ADP-ribose) polymérase, laquelle catalyse la formation d'un polymère d'ADP-ribose à partir de NAD+. Nous avons étudié le comportement de cet enzyme au cours de la régénération pancréatique (destruction du pancréas induite par un traitement à l'éthionine) et nous observons un pic de l'activité de la poly (ADP-ribose) polymérase qui précède le pic d'activité de l'ADN polymérase. De plus, cette augmentation d'activité de la poly (ADP-ribose) polymérase n'est pas due …
