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Colloque
Nous avons inséré divers fragments du génome du virus du polyome dans le plasmide pBR322 et nous avons étudié le pouvoir oncogénique des recombinants obtenus en les injectant à des rats nouveau-nés. Les plasmides contenant le fragment de génome viral construit par clivage de l'ADN viral au moyen de l'endonucléase de restriction BamHI ne produisent qu'une seule coupure dans l'ADN viral tardive. Pour cloner la région précoce mutée, l'ADN a été clivé par l'endonucléase HindIII et le plus grand des deux fragments obtenus a été inséré dans le site HindIII de pBR322. Le pouvoir oncogénique des recombinants a été éprouvé …
Colloque
La méthode consiste à allonger les extrémités 3'-terminales du fragment de DNA par des résidus de AMP ou de dTMP en présence de désoxynucléotidyltransférase terminale. Le plasmide pBR322, linéarisé par une coupure dans le site PstI ou BamII, est allongé par des chaînes complémentaires à celles du fragment. Après hybridation des chaînes complémentaires, on clôture le plasmide recombinant pour transformer la bactérie Y1776. Nous avons obtenu, par cette méthode, des recombinants contenant des fragments exogènes du virus du polynome, ayant conservé certaines propriétés biologiques du virus.
Colloque
Nous avons construit des recombinants entre le plasmide bactérien pBR322 et le DNA de 3 variants du virus du polyome: (i) A1, un variant à grandes plaques (11) P16 variant à petites plaques et (iii) ts-P155, un mutant thermosensible dérivé de P16. La carte physique de chaque recombinant a été établie par analyse électrophorétique des fragments de restriction sur gel d'agarose. Les plasmides recombinants contenant "l'insert" d'un gène viral non restreint mais uniquement après excision de la séquence colique au moyen d'une enzyme de restriction. Certains recombinants présentent une délétion dans la partie virale. Ils résultent vraisemblablement d'une excision de …
