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Colloque
Les métallothionéines (MT) sont de petites protéines caractérisées, entre autres, par leur habileté à capter les métaux lourds tels le cadmium, le mercure, le zinc, l'or etc. Nous avons purifié le mRNA de la MT de souris; nous avons préparé le cDNA que nous avons inséré dans le site Pst I du plasmide pBR322. Un plasmide recombinant, désigné M15, porte l'insertion dans une orientation telle que le "brin messager" de la β-lactamase est en alignement avec celui de la MT. Bien plus, les cadres de lecture des deux brins sont en phase. Toutefois, ce plasmide ne semble pas induire l'expression …
Colloque
Nous avons observé qu'à l'instar de maints organes de mammifères, les cellules LMTK de fibroblastes de souris maintenues en culture peuvent synthétiser la métallothionéine (MT). La protéine est identifiable par les caractéristiques suivantes: 1. faible poids moléculaire (6000-8000 daltons), 2. contenu élevé en cystéine, 3. absence de résidus aromatiques, 4. capacité de capter les métaux lourds. Ces éléments, ainsi que les glucocorticoïdes, peuvent en induire l'expression. En vue d'étudier la structure et les mécanismes régulateurs du gène de la MT, nous avons isolé des mutants résistants à de hautes concentrations de cadmium (lignées Cd^R); nous avons, en outre, préparé une …
Colloque
Nous avons observé qu'à l'instar de maints organes de mammifères, les cellules LMTK de fibroblastes de souris maintenues en culture peuvent synthétiser la métallothionéine (MT). La protéine est identifiable par les caractéristiques suivantes: 1. faible poids moléculaire (6000-8000 daltons), 2. contenu élevé en cystéine, 3. absence de résidus aromatiques, 4. capacité de capter les métaux lourds. Ces éléments, ainsi que les glucocorticoïdes, peuvent en induire l'expression. En vue d'étudier la structure et les mécanismes régulateurs du gène de la MT, nous avons isolé des mutants résistants à de hautes concentrations de cadmium (lignées Cd^R); nous avons, en outre, préparé une …
Colloque
Nous avons observé qu'à l'instar de maints organes de mammifères, les cellules LMTK de fibroblastes de souris maintenues en culture peuvent synthétiser la métallothionéine (MT). La protéine est identifiable par les caractéristiques suivantes: 1. faible poids moléculaire (6000-8000 daltons), 2. contenu élevé en cystéine, 3. absence de résidus aromatiques, 4. capacité de capter les métaux lourds. Ces éléments, ainsi que les glucocorticoïdes, peuvent en induire l'expression. En vue d'étudier la structure et les mécanismes régulateurs du gène de la MT, nous avons isolé des mutants résistants à de hautes concentrations de cadmium (lignées Cd^R); nous avons, en outre, préparé une …
Colloque
Les métallothionéines (MT) sont des protéines de poids moléculaire variant entre 8,000 et 10,000, capables de lier les métaux lourds (Ag, Au, Cd, Hg, Zn) et dont la synthèse est inductible par ces métaux. Nous avons identifié trois types de MT induites par le Cd dans le foie et le rein de souris. Dans les cellules cultivées de fibroblastes de souris, seul un de ces types est inductible. Par étude de la régulation des gènes codant pour ces MT, nous avons entrepris de les cloner. A partir du foie de souris injectée avec du Cd, nous avons purifié l'ARN messager …
Colloque
Nous avons isolé des mutants galactose− d’hamster chinois pour étudier la régulation des gènes des cellules de mammifères. Certains d’entre eux résultent de l’inactivation de l’enzyme galactokinase qui catalyse la réaction galactose + ATP → galactose-1-phosphate + ADP. Ils ont été isolés comme résistant à 5 mg de gal d/ml de milieu. La résistance est probablement due à l’absence des dérivés phosphorylés du dgal dans la cellule. Ce phénotype est stable après de nombreuses générations en l’absence de dgal. Le nombre de mutants résistants augmente après traitement avec l’EMS, agent mutagène. Par conséquent ce changement phénotypique est le résultat d’une …
Colloque
Parmi les méthodes de sélection de mutants de cellules somatiques, celle utilisant le bromodéoxyuridine (BUdR) est la plus simple (PNAS 1968, 60, 1275). Son application est cependant limitée parce que 1) le BUdR inhibe la ribonucléotide réductase (RRase) et 2) il y a compétition pour la synthèse du DNA entre le BUTP et le thymidine tri-phosphate (TTP) synthétisé. Nous avons montré que cette méthode peut être améliorée si le milieu contient en plus du BUdR de la déoxycytidine (dC) et du 5-fluoro-2 déoxyuridine (FdU). Le dC lève l’inhibition allostérique du BUdR sur la RRase et le FUdR bloque la synthèse …
Colloque
Jacob et Monod ont étudié la régulation des gènes bactériens en isolant des mutants lactose-. Nous avons procédé de même avec des cellules d'hamster chinois V6 en isolant des mutants Gal-. Les cellules V6 (Gal+ Glu+) peuvent croître en présence de galactose (Gal) ou en présence de glucose (Glu) ou en présence des deux. Après mutagénèse par l'éthyl méthanesulfonate et expression des mutations, quelque 5x10^5 cellules sont mises à croître dans le milieu de Dulbecco sans glucose, 2x10^-5M bromodeoxyuridine (BUdR) et 1 mg/cc de galactose pendant deux jours. Elles sont ensuite irradiées à 313 nm. Ceci tue les cellules de …
