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Colloque
La versatilité, la commodité et l'importance que la technique de dosage radio-immunologique démontre, créent le développement dans le domaine de la préparation d'antigènes. Les méthodes classiques de condensation de peptide avec une globuline produisent trop de sous-produits indésirés. Nos travaux portent sur la mise au point d'un protocole conjuguant covalente d'un haptene peptidique avec une albumine modifiée, de par les propriétés d'un acide aminé soufré synthétique. La minimisation de réactivité croisée des anticorps réside dans la haute homogénéité de l'antigène fabriqué, secondée de l'accessibilité à la purification chromatographique par affinité. Les auteurs discuteront de l'application de cette méthode à un …
Colloque
Le marquage par photoaffinité est une méthode biochimique qui permet d'attacher de façon spécifique et irréversible des substances possédant une affinité réciproque telles une hormone et son récepteur, un enzyme et son substrat, etc. Au moyen de cette technique, nous avons réussi à sonder un analogue photosensible de l'angiotensine II, l'Azidophénylalanine (azidoPhe)AT à son récepteur spécifique. Une préparation de membranes plasmatiques purifiées à partir d'homogénats de cellules de la couche glomérulée du cortex surrénalien de bœuf a été traitée au moyen de l'hormone photosensible (10^-8M). Après le traitement, la liaison d'un analogue radioactif de l'AT [(3H-NH2)Phe]AT est diminuée d'environ 50% …
Colloque
Selon des études ultérieures de structure-activité sur l'angiotensine II, les positions Tyr4 et Phe8 possédant des chaînes latérales aromatiques sont très importantes pour l'obtention de l'action hormonale. La substitution de l'acide aminé en position 8 par d'autres acides aminés naturels et non-naturels a démontré que le caractère aromatique n'influence pas sensiblement l'affinité du peptide mais plutôt sa capacité de stimulation. La synthèse de (4'-I)Phe8-AT nous a semblé prometteuse puisque cet acide aminé possédait des paramètres physico-chimiques intéressants (aromaticité, volume, lipophilicité) pour cette étude. Les études biologiques in vitro sur l'aorte de lapin et in vivo sur la pression artérielle moyenne …
Colloque
Les études chimiques, pharmacologiques et autres sur les peptides naturels se font souvent en remplaçant certains acides aminés avec des analogues synthétiques. Nous nous sommes intéressés aux analogues soufrés de la L-phénylalanine comme (4'-SO3H)Phe (1), (4'-SO2NH2)Phe (2) ou (4'-SH)Phe (3). Le protocole de préparation comprend la chlorosulfonation de L-Phe, suivi d'une hydrolyse (1), ou d'une ammonolyse (2), ou d'une réduction au dithiol (3). La protection du thiol libre du (4'-SH)Phe pour une application éventuelle en synthèse peptidique sur phase solide constitue le problème majeur de ce travail, étant donné l'instabilité ou l'insensibilité pour la p-thiophénylalanine des groupes de protection classiques …
Colloque
Dans des expériences ultérieures, nous avons étudié l'influence des résidus aromatiques sur l'activité biologique de l'angiotensine II (Asp-Arg-Val-Tyr-Val-His-Pro-Phe) (AT). Nous avons démontré que des modifications en position 4 (Tyr) induisent des changements d'affinité inversement proportionnels à l'électronégativité du noyau substitué. Par ailleurs, les mêmes modifications en position 8 (Phe) n'influencent pas sensiblement l'affinité du peptide mais sa capacité de stimulation. Celle-ci dépendrait du volume spatial et non de la modification en 8. La carboxyaniliane (Car), un analogue de la phénylalanine, contient un noyau aromatique ayant une très forte électronégativité, une grande lipophilie et un volume légèrement supérieur à celui du …
Colloque
La tyrosine en position 4 dans l'Angiotensine II (Asp-Arg-Val-Tyr-Val-His-Pro-Phe, AT) est essentielle pour l'activité biologique de ce peptide. Afin de mieux comprendre le rôle de cette position, une série d'analogues de l'AT modifiée en position 4 furent synthétisés: (i) L'acide aminé Tyr fut remplacé par les dérivés nitrés suivants: (4'-SO3) Phe et (4'-SO3NH2)Phe, permettant d'évaluer l'interaction d'une charge négative stable au niveau du site de liaison Y/T à un "isostère" non-chargé; (ii) un Tyr dans l'AT native fut modifié en (3'-NO2) Tyr et en (3'-NH2) Tyr. L'activité biologique de ces analogues de l'AT mesurée sur des bandes d'anses de lapin. …
Colloque
Pour le marquage radioactif d'hormones peptidiques, la tritiation catalytique d'un précurseur halogéné est la méthode la plus simple et souvent la plus simple. L'introduction d'un seul tritium ne mène à pas plus que 30 Ci/mmol mais couvre une activité spécifique de quelque 100 Ci/mmol est requise. L'addition à la 125I change trop les caractéristiques de l'hormone en question et s'élimine ainsi souvent. Les acides aminés précurseurs utilisés jusqu'ici étaient des Tyr halogénées, des acides aminés allyliques ou les (4'-Cl2Phe); (3',5'-Cl2Br1, I). Pour augmenter le nombre d'halogènes incorporés dans un peptide, surtout dans des cas où il n'y a pas de …
Colloque
L'activité myotropique de l'angiotensine II (AT) sur les bandelettes d'aorte de lapin peut être grandement altérée si l'on fait des modifications au niveau de sa position en position 4. On sait que si on substitue cette tyrosine par une phénylalanine, le groupe ionisable est enlevé et nous avons démontré que l'électro-négativité du substituant sera petite, et vice versa. Nous avons vérifié si l'ionisation du groupe phénolique de la tyrosine (ce qui devrait diminuer son électro-négativité) a un effet sur l'activité de l'AT. Nous avons utilisé [Sar1, Tyr4]-AT dérivée des valeurs de pH correspondant à différents niveaux d'ionisation. Le peptide [Sar1, …
Colloque
L'angiotensine II (ATII), l'hormone peptidique pour la pression artérielle, n'a pas encore d'antagoniste irréversible ou de longue durée d'action. Tout antagoniste spécifique connu agit réversiblement et s'est vite dégradé par des protéases. Pour bloquer irréversiblement le récepteur de l'ATII, nous avons entrepris de synthétiser des analogues photoisomérisables de l'ATII. Ces dérivés sont capables de fournir un lien covalent sous l'influence de lumière avec leur récepteur dans la paroi membranaire. Nous avons remplacé les acides aminés Tyr et/ou Phe avec 4'-azidophénylalanine, 4'-nitrophénylalanine et d'autres analogues d'acides aminés aromatiques dans la séquence d'un ATII très puissant: Sar-Arg-Val-Tyr-Val-His-Pro-Phe. En utilisant le nouvel acide …
Colloque
La chaîne latérale de l'acide aminé L-Phénylalanine (Phe) est caractérisée par les qualités suivantes : aromatique, lipophile, asymétrie sphérique en tournant Cα-Cβ et chargée (neutre). Un grand nombre d'hormones peptidiques porte dans leur séquence un ou plusieurs résidus de Phe. On a trouvé, dans le cas où il y a au moins deux Phe, que l'un préférablement joue le rôle actif dans la liaison peptide-récepteur, tandis que l'autre soit également responsable de la stimulation biologique. Pour clarifier cette différence de conduite, on a clarifié les résidus de Phe par d'autres résidus d'acides aminés comme Lα-Carboxyallylamine (Car) et mesuré la réponse …
