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Colloque
Le cytosquelette est un système intégré et fonctionnel de fibres (actine, tubuline, protéines filamenteuses) à la fois dynamique et coordonné. Une hypothèse suggère l'existence d'un réseau ultra-fin de filaments, le réseau microtrabéculaire, qui régirait l'ensemble des fonctions cellulaires reliées à ce système. Un protocole d'extraction du cytosquelette des leucocytes humains et de préparation pour la microscopie électronique a été développé dans ce laboratoire, et nous présentons les traitements successifs suivants: (1) Hanks + pipes + sucrose (HaPIS), pH 7,4; (2) tampon stabilisateur (STAB = pipes + HEPES + EGTA + Mg++), pH 6,9; (3) tampon d'extraction (STAB + Triton X …
Colloque
L'utilisation des membranes de polycarbonate présente des avantages; leur malléabilité diminue d'autant le stress dû aux manipulations et leur porosité favorise un libre échange des solutions de fixation. Elles permettent le maintien des cellules et de leurs configurations spatiales durant les étapes de préparation. L'influence de la solution tampon (Hanks + pipes + sucrose) et du cycle de traitement (GAOTTO) utilisé ne joue pas un rôle uniquement au moment de la fixation mais aussi dans la capacité de coloration et les propriétés des coupes. Les données obtenues nous permettent de présumer que les leucocytes nécessaires à leur analyse sont bien …
Colloque
Des leucocytes humains normaux, fixés au glutaraldéhyde-acide tannique subissent un cycle de traitements avec le tétroxyde d'osmium : le thiocarbohydrazide : le tétroxyde d'osmium. Les images obtenues au microscope électronique à balayage sont supérieures par le contraste élevé et des éléments électriques négligeables à celles obtenues après médication sous vide. Nous constatons une réduction moindre des cellules (mononucléaires et polymorphonucléaires) après les étapes de déshydratation et de séchage au point critique. Ces traitements permettent l'observation à des grossissements plus élevés que par les techniques conventionnelles. Dans tous les cas étudiés au moins un second traitement thiocarbohydrazide-tétroxyde d'osmium n'a pas été …
Colloque
L'utilisation du mélange-tampon Hanks + Pipes + sucrose, en association avec la glutaraldéhyde et le tétraoxyde d'osmium, semble représenter un mode très délicat de préparation pour l'observation au microscope électronique à transmission des cultures de leucocytes humains isolés du sang périphérique. Parmi les cellules non-cultivées nous avons noté que leurs noyaux étaient nettement typiques, e.g., noyau oval avec de nombreuses échancrures, nucléoplasme avec un matériel dense en agrégats périphériques et matrice cytoplasmique d'apparence granuleuse. Dans toutes ces cellules mononucléaires un réticulum endoplasmique lisse fut observé et les mitochondries, larges et nombreuses, présentaient un agencement de type rosette autour du noyau. …
Colloque
L'observation de la structure de surface de leucocytes mononucléaires obtenus de patients leucémiques (LMA et LLC) démontre, dans les deux cas, une présence importante de lymphocytes lisses (environ 62%) et de lymphocytes modérément recouverts de microvillosités affaissées, en forme de tronc (environ 30%). Après incubation de 20 h dans un sérum autologue, en présence des lectines phytohémagglutinine et P. americana, on peut distinguer des structures étonnamment caractéristiques des leucocytes leucémiques. En effet, les échantillons de LMA contiennent des cellules à configuration allongée avec des extensions relativement épaisses. De plus, ces extensions sont lisses ou sont recouvertes de multiples bourgeons. D'autre …
Colloque
L'examen au SEM de l'architecture de plusieurs échantillons de leucocytes humains, préparés dans les tampons-fixateurs Hanks (Ha)-glutaraldéhyde (G CHO), Hepes (He)-G CHO ou Ha-He-G CHO, a été effectué. Les observations suivantes ont été notées: (i) l'utilisation du milieu de suspension Ha est nettement supérieure comme véhicule de fixation, malgré que le pH initial (7.4) du milieu Ha-cellules peut varier de 0.4 unités après l'addition de Ha-G CHO. Toutefois, le pH du milieu de fixation He-cellules G CHO demeure stable même après 30 min; (ii) l'addition du zwitterion He au tampon Ha maintient non seulement de façon très adéquate l'architecture externe …
Colloque
Des leucocytes humains, normaux et fraîchement prélevés, et des leucocytes cultivés en présence de RPMI-1640, de sérum, de Pokeweed et de phytohémagglutinine ont été observés à l'aide du microscope électronique à balayage. Les cellules fixées dans le glutaraldéhyde (tampon Sørensen-NaCl 0.9%-sucrose 0.22M, pH 7.4) sont déposées sur des lames de verre recouvertes de polylysine. Des microvillosités et des structures microfiliformes sont présentes à la surface des cellules normales. Les leucocytes cultivés et examinés après 20 et 68 hres d'incubation et les surfaces cellulaires restent des structures microvillosités (plissées) dont le nombre peut varier de façon importante. Des prolongements digitiformes semblant …
Colloque
Des leucocytes humains, normaux et fraîchement prélevés, et des leucocytes cultivés en présence de RPMI-1640, de sérum, de Pokeweed et de phytohémagglutinine ont été observés à l'aide du microscope électronique à balayage. Les cellules fixées dans le glutaraldéhyde (tampon Sørensen-NaCl 0.9%-sucrose 0.22M, pH 7.4) sont déposées sur des lames de verre recouvertes de polylysine. Des microvillosités et des structures microfiliformes sont présentes à la surface des cellules normales. Les leucocytes cultivés et examinés après 20 et 68 hres d'incubation et les surfaces cellulaires restent des structures microvillosités (plissées) dont le nombre peut varier de façon importante. Des prolongements digitiformes semblant …
