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Le domaine liant ras (DLR) de raf appartient à la même superfamille qu'ubiquitine, ferrodoxine et tous les domaines liant ras (DLR) connus. Tous les membres de la superfamille ont une structure globale identique, cependant leur degré d'homologie au niveau de la séquence primaire est inférieure à 15 %. Par alignement de séquences et des simulations informatiques, la conservation de huit résidus dans l'évolution à travers la superfamille a été démontrée. Nous proposons que ces résidus constituent le nucléus de repliement de cette superfamille et spécifiquement du DLR de raf. Pour confirmer notre hypothèse, nous avons dégénéré la séquence du DLR …
Les interactions RNA-protéines jouent un rôle crucial dans le contrôle de plusieurs phénomènes vitaux. Notre but est de caractériser la liaison entre la protéine ribosomique S7 de la petite sous-unité ribosomique d'Escherichia coli à une portion du domaine 3' majeur du RNA ribosomique 16S. Nous utilisons un plasmide, pFD3LH, à partir duquel nous pouvons produire par transcription in vitro la portion du RNA qui lie la protéine S7. Nous avons aussi cloné le gène correspondant à la protéine S7 dans un vecteur d'expression bactérien sous contrôle d'un promoteur T7. Une queue d'histidines a été introduite dans la partie N-terminale de …
Les interactions RNA-protéines contrôlent de multiples processus biologiques et le ribosome constitue un modèle intéressant d'études de ces interactions. Le gène codant pour la protéine S7 de la petite sous-unité ribosomique d'E. coli a été isolé par amplification au PCR à partir du DNA génomique de la bactérie E. coli K12A19. Ce gène a été muni d'un "tag à histidine", introduit dans le vecteur d'expression pET21a(+), et exprimé dans les cellules BL21(DE3)pLysS. Des mutations par délétion ou par substitution ont été introduites dans différentes portions de la protéine, principalement les portions N et C terminales et une portion centrale correspondant …