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Communication
Les patients souffrant d'anémie hémolytique ont une plus grande quantité de précurseurs érythroïdes dans le sang. Cette propriété constitue un critère de sélection des gènes de la lignée érythroïde. Parmi ceux-ci, le marqueur B(MB GenBank 64701)est une séquence codante de 451 pb dont la protéine correspondante est homologue à l'interféron alpha-A de boeuf (Larochelle, Marceau et de Médicis, J. Leukocyte Biol., 1994). MB a été exprimé dans un système bactérien dans le but de mesurer son activité biologique sur les cellules du sang et pour obtenir des anticorps polyclonaux chez le lapin. MB a été sous-cloné dans trois vecteurs différents. …
Communication
Le clone 43 MB a été isolé à partir d'une librairie d'ADNc leucocytaire humaine (lambdaTriplEx, Clontech). Sa séquence de 2 kb (GenBank AF187272) est nouvelle et homologue à l'extrémité 3' de l'ADNc de la ninéine de souris (GenBank U40342). La séquence protéique correspondante possède 70 % d'homologie avec la ninéine de souris. L'extrémité 3' du clone 43MB se termine par une séquence nouvelle, non-homologue à la ninéine de souris et ne comporte pas de polyA. L'extrémité 3' de l'ADNc de la ninéine humaine a donc été recherchée par extension d'amorce sur deux librairies Marathon (Clontech) de leucocytes et de placenta. …
Colloque
Nous avons utilisé deux marqueurs génétiques, hmf-1 et hmf-2, pour étudier le génome leucocytaire d’un patient affecté d’anémie hémolytique non-sphérocytaire d’origine inconnue (G.G), et de deux patients dont l’anémie hémolytique est due à une déficience en pyruvate kinase (MED and AC). Hmf-1 est un fragment génomique humain de 346 pb avec 48% d’homologie avec le récepteur du facteur de croissance plaquettaire humain et hmf-2 est un fragment de 451 pb avec 47% d’homologie avec l’interféron A- de boeuf. Un réarrangement génomique de hmf-1 est détecté par Southern blot chez AC. Une amplification par un facteur de 5 de hmf-2 est …
Colloque
L'anémie hémolytique congénitale non-sphérocytaire, due à une déficience en pyruvate kinase I', est une maladie autosomique récessive. L'exon 6 du gène de cinq patients de l'Est du Québec a été amplifié par "polymerase chain reaction (PCR)" et directement séquencé. Aucune mutation n'a été identifiée dans l'exon 6, chez ces patients. La présence de bandes supplémentaires dans le patron électrophorétique des produits d'amplification de l'exon 6 a été observée chez quatre patients sur cinq. Cette anomalie était absente chez huit individus normaux. Nous avons montré que c'est l'amorce de séquence sens, utilisée dans l'amplification de l'exon 6, qui provoque l'apparition de …
Colloque
La pyruvate kinase, un enzyme de la glycolyse, est trouvé chez la plupart des organismes vivants. Certaines séquences peptidiques de la pyruvate kinase sont conservées à travers l'évolution depuis les micro-organismes jusqu'à l'homme. En utilisant comme amorces deux nucléotides de synthèse "dégénérés," l'un complémentaire au brin codant, et l'autre complémentaire au brin non-codant de deux régions homologues proches dans le gène, nous avons pu amplifier l'ADN génomique correspondant à la pyruvate kinase dans chaque autre espèce vivante. Cette stratégie a permis de cloner une partie du gène de la pyruvate kinase L humaine (680pb) et de la pyruvate kinase de …
Colloque
La pyruvate kinase de Halobacterium cutirubrum a été partiellement purifiée en trois étapes : préparation d'un extrait bactérien, précipitation au sulfate d'ammonium et chromatographie d'hydrophobicité. La croissance bactérienne se fait même complète à 37°C sous aération et en agitation vigoureuses. Les cellules récoltées avant d'atteindre la phase stationnaire sont brisées à l'alumine. Le test d'activité de la pyruvate kinase, un test spectrophotométrique couplé avec la lactate déshydrogénase, a été mis au point après étude de l'effet de la concentration en sel et de la stabilité en fonction du pH et de la concentration en sel a aussi été menée avant …
Colloque
Lorsqu'un homogénat de foie de rat est traité par l'ATP-32P en présence de protéine kinase active à l'AMP cyclique, un grand nombre de protéines sont marquées par incorporation covalente de phosphate radioactif. La séparation des protéines par deux méthodes différentes d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide permet d'isoler l'isomère de la pyruvate kinase. Par autoradiographie ou par compétition sélectrophorique, on démontre l'incorporation de phosphate marqué dans la pyruvate kinase. La phosphorylation in vitro est considérée comme un modèle de la phosphorylation in vivo, par laquelle les agents hormonaux comme le glucagon et l'isoprénylène pour inhiber la glycolyse dans le foie. Les …
