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Colloque
Le processus de régulation de volume après un choc hypotonique (RVD) s'effectue, dans les cellules MDCK, grâce à l'expulsion d'une certaine quantité d'osmolytes au milieu intracellulaire. Les osmolytes qui sont principalement impliqués dans la RVD sont les ions K+ et Cl- et certains acides aminés (aa) tels l'aspartate, le glutamate et la taurine. L'expulsion des ions s'effectue au moyen de l'activation de canaux potassiques sélectifs respectivement aux deux ions. Nous avons étudié la possible implication de l'un de ces canaux dans la sortie des acides aminés pendant la RVD. Nous avons utilisé le patch-clamp dans l'étude de la perméabilité du …
Colloque
La technique du "Single channel Patch-Clamp" a été employée dans l'étude de la régulation de volume sur les cellules épithéliales en culture MDCK, afin de déterminer les différentes conductances ioniques qui s'activent pendant ce processus. L'exposition des cellules à une solution hypotonique induit une augmentation du volume cellulaire. La réponse à cette dilatation est l'expulsion d'une quantité de soluté intracellulaire, ce qui ramène le volume vers des valeurs normales. Nos expériences montrent que jusqu'à 4 différents canaux peuvent être activés. En particulier nous avons mis en évidence l'activation d'un canal potassique de 27.4±3.3 pS (PNa/PK=.04). Ensuite nous nous sommes concentrés …
Colloque
La technique de "patch clamp" nous a permis de mettre en évidence la présence d'un canal potassique (PK/PNa = 17) à rectification anormale dont les conductances pour les courants entrants et sortants sont respectivement de 50 pS et 10 pS en condition symétrique de KCl (200 mM). Les courbes I-V obtenues pour différentes concentrations de KCl externe ont été interprétées en fonction d'un modèle à 2 barrières-1 site. Le calcium interne active le canal à des concentrations de 0.1 à 1 µM non pas en augmentant la durée moyenne des ouvertures mais surtout en augmentant le taux d'ouverture du canal; …
Colloque
Les cellules HeLa possèdent des récepteurs histaminiques de type H1. Ces cellules ont aussi des canaux potassiques activés par le calcium intracellulaire à des concentrations variant de 0.1 à 1 µM. En utilisant la méthode dite "extracellular patch clamp", nous avons pu observer que l'activation des récepteurs H1 en présence de 10-4 M histamine avait pour effet de provoquer l'ouverture de ces canaux et ce de façon oscillatoire, c-à-d., qu'à une période marquée par une fréquence élevée d'ouverture du canal succédait une période de silence total. En présence de 10-4 M de trifluoperazine, un inhibiteur connu de la calmoduline, ce …
Colloque
On considère généralement que l'enzyme Na-K-ATPase est responsable du maintien des gradients ioniques et, par conséquent, du volume des cellules épithéliales. L'utilisation de la ouabaïne, inhibiteur spécifique de cette enzyme, devrait donc produire un gonflement cellulaire. Dans le cas des cellules en culture MDCK, on observe, en mesurant les contenus intracellulaires, une augmentation du sodium et du chlore et une perte de potassium et d'acides aminés. Par contre, on n'observe aucune augmentation du volume cellulaire (pour des cellules en suspension). Ceci s'explique par le fait que le gain en chlore n'est pas accompagné d'une augmentation du contenu total en anions. …
Colloque
Certains ionophores sont couramment utilisés dans les expériences biologiques pour augmenter la perméabilité membranaire à certains ions. Dans des mesures de potentiel membranaire à l'aide de marqueur fluorescent, on se sert de la valynomycine pour changer la perméabilité au potassium des membranes et obtenir ainsi une calibration de la variation de la fluorescence des marqueurs en fonction du potentiel. Le mode d'action des ionophores est mis en évidence par les expériences de conductance effectuées sur les membranes bi-lipidiques (BM) et les vésicules. Le potentiel membranaire, enregistré à l'aide de micro-électrode, varie avec la densité cellulaire des CHO. Une bassemplitude du …
Colloque
Le potentiel membranaire des cellules L en culture a été mesuré à l'aide de microélectrodes. Ce potentiel oscille continuellement entre -15mV et -40mV à une fréquence lente de 3 à 4 cycles par minute. Simultanément la résistance membranaire a été mesurée et elle aussi oscille entre 37 et 22 Mohms. Ces oscillations sont observées dans des grosses cellules qui ont arrêté de se diviser, et à l'occasion dans des petites cellules en activité mitotique. À la suite de l'application de courant constant hyperpolarisant ou dépolarisant, il a été observé que les variations de résistance étaient indépendantes du potentiel membranaire. Le …
Colloque
Les membranes artificielles ont été fabriquées à partir de la technique de Mueller et Rudin (1969) et un antibiotique particulièrement intéressant, l'alaméthicine, y a été ajouté. Cet antibiotique a la propriété de changer les conductances ioniques de la membrane et ce changement est dépendant du potentiel appliqué sur la membrane. Il a été possible de mesurer le changement de conductance de la membrane en fonction du potentiel et du temps et par la suite de calculer les conductances mesurées à partir du modèle développé par Roy (1971).
Colloque
L'étude de la structure et des fonctions de membranes a acquis une grande importance depuis quelques années en biologie moléculaire et cellulaire. Dans cette vaste entreprise se situe le problème de la diffusion à travers ces membranes. Un modèle a été développé à partir de la théorie de diffusion dans les liquides et les solides avec quelques hypothèses assez générales sur la composition des membranes. Un point fondamental à considérer est la répartition des molécules diffusantes entre deux milieux: l'eau et la membrane. Il peut y avoir des affinités spécifiques entre des molécules ou des ions en solution et des …
Colloque
La fonction de base de la cellule nerveuse est la transmission d'impulsions électriques; le processus de conduction est réglé par la diffusion des ions sodium et potassium à travers la membrane cellulaire. Un modèle, basé sur la théorie de conduction électrique dans les cristaux ioniques, tente d'expliquer la conductivité de la membrane. L'hypothèse de base est la formation de complexes ion-protéine qui servent de canaux conducteurs; la création de vacances dans le complexe permet la diffusion des ions. Les équations pour les conductances ioniques sont développées et les calculs théoriques comparés aux résultats expérimentaux.
