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Colloque
Nous avons montré précédemment que la streptomycine (Sm) se lie au RNA 16S de la sous-unité ribosomique 30S d'E. coli, dans la région des bases 892 à 917. Nous avons introduit des délétions dans cette région en utilisant un plasmide construit dans notre laboratoire, pPM112, qui contient le gène codant pour le RNA 16S, directement sous le promoteur pour le phage T7. Les délétions ont été produites dans pPM112 par mutagénèse dirigée à l'aide d'un oligonucleotide synthétique en utilisant le système du phage M13. Nous avons construit 2 plasmides mutés, pMAG10 et pMAG23, qui ont respectivement amputés des bases 896 …
Colloque
Alors qu'il existe de nombreuses données concernant la stimulation des erreurs de traduction par la néomycine dans des systèmes acellulaires dirigés par un RNA messager artificiel, les données concernant cette action de la néomycine dans des systèmes in vivo sont quasiment inexistantes. Nous avons étudié la stimulation des erreurs de traduction par la néomycine dans trois systèmes in vivo: la suppression de mutations non-sens de phage T4, évaluée d'après le taux d'éclatement ("burst size") du phage; la suppression de mutations de déphasage ("frameshift") dans le gène lacZ d'E. coli, évaluée d'après la mesure de l'activité β-galactosidase, la synthèse de protéines …
Colloque
Alors qu'il existe de nombreuses données concernant la stimulation des erreurs de traduction par la néomycine dans des systèmes acellulaires dirigés par un RNA messager artificiel, les données concernant cette action de la néomycine dans des systèmes in vivo sont quasiment inexistantes. Nous avons étudié la stimulation des erreurs de traduction par la néomycine dans trois systèmes in vivo: la suppression de mutations non-sens de phage T4, évaluée d'après le taux d'éclatement ("burst size") du phage; la suppression de mutations de déphasage ("frameshift") dans le gène lacZ d'E. coli, évaluée d'après la mesure de l'activité β-galactosidase, la synthèse de protéines …
Colloque
Des mutants ribosomiques d'Escherichia coli K12Y10 résistants à une faible dose de néomycine (Nm^r) ont été sélectionnés sur milieu minimum succinate soit spontanément soit après traitement par un agent mutagène. Les ribosomes de ces mutants ont été purifiés et caractérisés dans différents systèmes acellulaires de traduction, dirigés soit par un messager artificiel, le poly(U) ou le poly(A), soit par un messager naturel, le RNA du phage MS2. Les expériences consistent à mesurer, in vitro, en l'absence ou la présence de néomycine, l'incorporation d'acides aminés correspondant au message (synthèse normale) ou l'incorporation d'acides aminés erronés (erreurs de lecture). La mutation Nm^r …
