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Colloque
Parmi les méthodes de sélection de mutants de cellules somatiques, celle utilisant le bromodéoxyuridine (BUdR) est la plus simple (PNAS 1968, 60, 1275). Son application est cependant limitée parce que 1) le BUdR inhibe la ribonucléotide réductase (RRase) et 2) il y a compétition pour la synthèse du DNA entre le BUTP et le thymidine tri-phosphate (TTP) synthétisé. Nous avons montré que cette méthode peut être améliorée si le milieu contient en plus du BUdR de la déoxycytidine (dC) et du 5-fluoro-2 déoxyuridine (FdU). Le dC lève l’inhibition allostérique du BUdR sur la RRase et le FUdR bloque la synthèse …
Colloque
Jacob et Monod ont étudié la régulation des gènes bactériens en isolant des mutants lactose-. Nous avons procédé de même avec des cellules d'hamster chinois V6 en isolant des mutants Gal-. Les cellules V6 (Gal+ Glu+) peuvent croître en présence de galactose (Gal) ou en présence de glucose (Glu) ou en présence des deux. Après mutagénèse par l'éthyl méthanesulfonate et expression des mutations, quelque 5x10^5 cellules sont mises à croître dans le milieu de Dulbecco sans glucose, 2x10^-5M bromodeoxyuridine (BUdR) et 1 mg/cc de galactose pendant deux jours. Elles sont ensuite irradiées à 313 nm. Ceci tue les cellules de …
