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Colloque
L'adénosine, une substance naturelle présente dans tous les milieux biologiques possède des propriétés anti-inflammatoires puissantes. En effet, l'adénosine, agissant via son récepteur A2a, inhibe plusieurs fonctions des neutrophiles, dont la production de l'anion superoxyde, la dégranulation, la migration et la synthèse des leucotriènes. Le présent travail visait à déterminer par quel(s) mécanisme(s) l'adénosine bloque la synthèse des leucotriènes dans le neutrophile humain. L'analyse directe par spectrométrie de masse de la concentration d'acide arachidonique (AA) dans les suspensions de neutrophiles a permis de déterminer que le CGS-21680, un analogue de l'adénosine agissant comme agoniste spécifique du récepteur A2s, inhibe complètement la …
Colloque
Il est bien établi que les neutrophiles humains sont incapables de synthétiser des leucotriènes s'ils sont incubés avec de l'acide arachidonique (AA) en absence d'agonistes. Nous avons récemment observé que l'adénosine, une substance naturelle produite par les neutrophiles en culture, a des effets inhibiteurs sur plusieurs fonctions des neutrophiles. Dans le présent travail, nous avons observé que les neutrophiles humains incubés avec de l'adénosine déaminase, une enzyme qui hydrolyse l'adénosine, synthétisent des quantités importantes de leucotriènes et d'acides hydroxyeicosatrienoïques lorsque de l'AA exogène est ajouté à la suspension cellulaire. Cette synthèse importante de leucotriènes (10-40 pmol/10 à la 6 cellules) …
Colloque
Le processus inflammatoire est un mécanisme de défense de première ligne contre les infections microbiennes et virales. L'inflammation est modulée, entre autres, par les leucotriènes (LTs) et les prostaglandines (PGs), médiateurs proinflammatoires issus de la dioxygénation de l'acide arachidonique (AA) via la voie de la 5-lipoxygénase (5-LO) et de la cyclooxygénase (COX), respectivement. Nos résultats antérieurs démontrent que le virus Epstein-Barr infecte les neutrophiles et les monocytes humains et module leur synthèse protéique. La présente étude porte sur l'effet d'EBV sur la synthèse des LTs et des PGs par les phagocytes. Les résultats obtenus démontrent qu'EBV potentialise la synthèse des …
Colloque
Le niveau intracellulaire de glutathion peroxyde (GPx) a été proposé être un des facteurs intervenant dans la régulation de la 5-lipoxygénase (5-LO), une enzyme clé du métabolisme de l'acide arachidonique et de la biosynthèse des leukotriènes. Pour vérifier l'importance hypothétique des GPx dans le contrôle du shunt d'hydroperoxydes requis pour l'activation de la 5-LO, nous utilisons des transfectants duodulaires exprimant des niveaux de GPx normaux et un modèle animal où négation du niveau de GPx est effectuée par des vecteurs d'expression sens et antisens. Les deux principales lignées utilisées sont: des cellules promyéloblastiques humaines HL60 exprimant la 5-LO et des …
Colloque
Le DPI, un inhibiteur de la NADPH oxydase du neutrophile, inhibe la production de H2O2 et le métabolisme oxydatif des LTC4, D4 et E4 dans les neutrophiles stimulés avec le phorbol myristate acétate (PMA); les effets du DPI sont détectables à 0,1µM et le métabolisme des LTC4, D4 et E4 est complètement inhibé à 10 µM. Le DPI inhibe également l'oxydation de LTB4 exogène et de LTB4 endogène dans les neutrophiles stimulés à l'ionophore A23187; le DPI n'a cependant aucun effet sur la synthèse ou le métabolisme des 6-trans- et 6-trans-12-epiLTB4, de même que sur la synthèse de l'acide 5S-hydroxy-6,8,11,14-éicosatétraénoïque. …
Colloque
La présente étude met en évidence un effet stimulateur du LTB4 et du PAF-acéther endogènes sur la synthèse de leucotriènes induite par l'ionophore A23187. Les neutrophiles utilisés ont été isolés du sang périphérique de sujets normaux, et les analyses ont été effectuées par RP-HPLC. Nous avons observé que la synthèse de leucotriènes induite par de fortes doses d'ionophore (1μM) est partiellement inhibée (40-60%) par la kinine pertussis, alors qu'à des doses d'ionophore ne permettant pas la formation de leucotriènes (0.1mM), la toxine est sans effet sur l'utilisation par la 5-lipoxygénase d'un substrat exogène. Ainsi, il apparaît que lorsque l'ionophore induit …
Colloque
La 5-LO est une enzyme clé pour la synthèse des leucotriènes (LT) dans les PMN. Lorsque les PMN sont exposés au facteur de croissance hématopoïétique GM-CSF, celui-ci potentialise la synthèse de LT induite par un second stimulus. Cet effet du GM-CSF est aboli par un traitement des cellules à la cycloheximide ou à l'actinomycine D. Ces résultats suggèrent que l'effet activateur du GM-CSF soit dû à une augmentation de l'activité 5-LO, nous avons étudié les effets du GM-CSF sur l'expression de cette enzyme. Par immunoprécipitation, nous avons pu observer une élévation des niveaux de 5-LO dans les PMN exposés au …
Colloque
Les cellules de Clara des voies aériennes ont des caractéristiques morphologiques et cytochimiques suggérant des fonctions sécrétrices et oxydatives. Le but de notre travail était d'isoler ces cellules et d'étudier le métabolisme de l'acide arachidonique. Le traitement du poumon de cobaye à la protéase XIV permet la récupération de 66.8 x 10^6 cellules. Ces cellules ont été partiellement purifiées par quatre étapes d'élutriation (39-46% de Clara). L'adhésion sur boîte de Petri permet d'éliminer les macrophages. Un gradient de Percoll discrimine 23 millions de pures cellules de Clara (75-85%). Mises en présence de LTA4, de l'ionophore de Ca A23187 et/ou de …
Colloque
Le but de notre étude était de développer une méthode d'analyse pour évaluer la synthèse des LT et autres métabolites de l'acide arachidonique (AA) dans le sang entier "ex vivo". Nous avons analysé les niveaux de métabolites de l'AA par les plaquettes et leucocytes du sang entier (hépariné) après incubation avec un ionophore (A23187) pendant 5 min à 37°C. Le sang est centrifugé et le plasma dénaturé par l'addition de 1 volume de méthanol/acétone (1/1, v/v) contenant 25 ng de PGB2 (B2) et de 19-OH-PGB2 (standards internes) par ml de précipité est éliminé par centrifugation et le surnageant analysé directement …
Colloque
Cette étude vise à identifier les métabolites de l'acide arachidonique (AA) libérés par les pneumocytes de type II (PII) de cobaye. Après digestion enzymatique (713.4 ± 41.3 x 10^6, viabilité 86%), les cellules sont séparées par élutriation et la fraction (3 débit: 15 ml/min) est incubée 20 min à 37°C dans des boîtes de Pétri tapissées d'égine de cobaye. Suite à cette incubation, les PII représentent 90% des cellules demeurées en suspension. La libération basale de TxB2, 6-céto-PGF1α et de PGE2 par 2 x 10^6 cellules PII incubées pour 10 min à 37°C d'environ 105, 110 et 77 pg/ml respectivement. …
