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Colloque
La technique d'inactivation par les radiations a été utilisée afin de mesurer la taille moléculaire du transporteur de phosphate (Pi) des tubules proximaux du rein. Cette méthode permet de déterminer la taille moléculaire comprenant toutes les sous-unités protéiques impliquées dans l'activité biologique. Suite à l'irradiation à des doses croissantes de cobalt 60, l'activité résiduelle des enzymes étudiées est mesurée. La logique de l'analyse nous permet de relier perte d'activité biologique à la taille moléculaire des enzymes et/ou des transporteurs étudiés. L'utilisation de vésicules membranaires de tubule rénal a permis de mesurer l'activité du transporteur de Pi dans les milieux intra- …
Colloque
Dans le but de purifier et d'identifier la protéine transportrice responsable de la réabsorption rénale du phosphate, nous avons mis au point un protocole de reconstitution qui permet de mesurer son activité après chaque étape de la purification. Le transporteur reconstitué à partir du rein de bœuf possède les principales caractéristiques du transporteur natif dont une affinité semblable (40 μM) pour le phosphate. La captation de phosphate par les protéoliposomes est fortement stimulée (2000-300%) par la présence d'un gradient transmembranaire de sodium. La taille moléculaire du transporteur a été évaluée avec la technique d'inactivation par irradiation. Le transporteur bovin possède …
Colloque
Nous caractérisons un marqueur enzymatique spécifique au rein, qui pourrait complémenter l'étude échographique des pathologies rénales obstructives et néphrotiques. Le dosage différentiel des tréhalases (tréh.) intestinale et rénale du liquide amniotique (L.A.) permettrait un tel diagnostic. Premièrement nous avons déterminé leur solubilité respective dans le L.A. par filtration sur tamis moléculaire. L'activité tréhalasique a été évaluée en deux pics, le premier (volume mort) correspond à la tréh. membranaire (forme insoluble) alors que le deuxième (forme soluble) a une masse de 175 kD (tréh. soluble) correspondant à la valeur obtenue pour le rein de lapin. Deuxièmement par isoélectrofocalisation, la tréh. du …
Colloque
La méthode d'IR-IN permet d'obtenir le "target size" (TS) de protéines in situ en évaluant la diminution d'une activité biologique en fonction de la dose d'irradiation absorbée. Deux types de récepteurs ont été identifiés pour le peptide natriurétique des oreillettes (ANP) : le récepteur A, lié à la guanylate cyclase (GC) et le récepteur C, dit de clairance. La technique d'IR-IN a été utilisée afin d'évaluer les TS des unités fonctionnelles de GC et de liaison de l'1-25I-ANP ainsi que le mécanisme de stimulation de la GC par l'ANP. Des membranes de cortex surrénalien (BAC), de placentas et de cellules …
Colloque
La réabsorption rénale du phosphate se fait principalement au niveau de la membrane à bordure en brosse du tubule contourné proximal. Récemment, il a été démontré que l'acide phosphonohformique (PFA) inhibe le transport de phosphate de façon compétitive sans qu'il ne soit lui-même transporté. De plus, l'inhibition est cellulaire dépendante du pH, de l'inhibition et elle aussi dépendante du gradient de sodium et semble spécifique à ce transporteur. L'inactivation aux radiations révèle une taille des protéines associées à l'activité transporteurs qui est nécessaire pour les purifier. Nous avons utilisé cette technique pour comparer la taille moléculaire des protéines de transport …
