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Communication
La sécrétion d’anticorps par les lymphocytes B permet à l’organisme de se défendre contre les agents infectieux. Pour que les lymphocytes B deviennent de bonnes cellules sécrétrices d’anticorps (CSA) spécifiques, ils doivent passer par une série d’étapes de différenciation, débutant par la rencontre de leur Ag. Le lymphocyte B reçoit alors l’aide des lymphocytes T par des signaux membranaires, impliquant le récepteur CD154 qui stimule le CD40 en surface du lymphocyte B, et solubles, via la sécrétion d’IL-4. Ces interactions permettent aux lymphocytes B de proliférer, créant ainsi un groupe de cellules pouvant répondre à l’Ag. Ensuite, le lymphocyte B …
Colloque
L'antigène majeur du groupe sanguin Rhésus (Rh(D)) est très immunogène chez l'humain et provoque la synthèse d'anti-Rh(D) qui peuvent causer des réactions transfusionnelles graves et la maladie hémolytique du nouveau-né. Afin de caractériser le type de réponse immunitaire humaine à cet antigène, nous avons entrepris le séquençage d'une banque d'anticorps monoclonaux humains spécifiques à l'antigène D. Les séquences des régions variables des chaînes lourdes et légères sont obtenues au moyen d'oligonucléotides. Les résultats obtenus jusqu'à maintenant dans nos séquençages indiquent que les segments VK et Vl utilisés pour ces anticorps semblent appartenir à la même famille. Ce résultat est intéressant …
Colloque
L’étude des gènes modulant la prolifération des hybridomes de lymphocytes B revêt un intérêt biotechnologique important dû à leur utilisation dans la production d’anticorps monoclonaux. Le but de ce travail était de développer un modèle d’expression permettant la construction endogène d’ARN anti-sens sous contrôle d’un inducteur externe. Nous avons utilisé un vecteur d’expression (pMSG-CAT) portant le gène rapporteur CAT (Chloramphenicol Acetyl Transférase) sous le contrôle du promoteur MMTV-LTR (Mouse Mammary Tumor Virus), inductible via des glucocorticoïdes. Nous avons transfecté pMSG-CAT par Électroporations dans une lignée d’hybridomes et nous avons obtenu un transfectant stable dont l’activité CAT s’est avérée inductible par …
Colloque
Il est maintenant connu que les plasmocytes primaires et les hybrides de cellules B requièrent la présence d'IL-6 pour leur prolifération in vitro. Nous avons observé précédemment qu'une inhibition de synthèse protéique par la cycloheximide dans une lignée d'hybride dépendante de l'IL-6 produisait une dégradation rapide des mRNAs et actine et s'accompagnait d'une perte de viabilité des cellules in vitro. Ce phénomène semble être relié à la sensibilité à l'IL-6 puisque nous avons observé que les cellules IL-6 indépendantes en absence d'IL-6 montraient une sensibilité accrue à la cycloheximide. Dans le but de mieux caractériser ces effets, des hybrides de …
Colloque
Il est maintenant connu que la diversité des anticorps, observée lors de la réponse immunitaire, est la conséquence des réarrangements somatiques de segments de gènes dans les cellules pré-B. De plus, dans le cas d'antigènes de petite taille (haptènes), il a été observé que le nombre des différents segments de gènes utilisés était limité ("réponse restreinte"). Dans le but de déterminer si ce phénomène est observé lors de la réponse immunitaire dirigée contre un antigène de groupe sanguin, nous avons entrepris l'analyse au niveau moléculaire des différents anti-A monoclonaux. Les résultats obtenus (par séquençage direct des mRNA des chaînes lourdes …
Colloque
Nous avons précédemment décrit la caractérisation préliminaire d'une monokine différente du TNF alpha et capable d'inhiber la prolifération d'hybridomes préparés à partir de cellules de rate de souris. L'analyse des anticorps produits par les cellules sensibles a révélé que la lyse sensible à ce facteur est dérivée d'un lymphocyte B. Des expériences additionnelles de caractérisation biochimique ont montré que ce facteur est distinct du transforming growth factor (TGF-β) et de l'IFNβ, résistant à l'inactivation par des agents dénaturants tels que l'urée et la guanidine-HCL mais sensible au 2-mercaptoéthanol. Ces résultats suggèrent que ce facteur pourrait constituer un nouveau type d'interleukine …
Colloque
Les plasmocytomes primaires et les hybridomes de cellules B expriment un gène myc dérégulé suite à une translocation dans le locus des gènes d'Ig et requièrent la présence de l'IL 6 pour leur prolifération in vitro. La découverte récente que l'IL 6 peut activer l'expression des gènes d'Ig dans les lymphocytes B a suggéré un rôle de l'IL 6 dans le contrôle de l'expression de l'oncogène myc transloqué dans ce type de cellules. Nous avons étudié l'effet de l'IL 6 sur le niveau d'expression de l'oncogène myc dans une lignée d'hybridome dépendante de l'IL 6. Les résultats obtenus n'ont pas …
Colloque
Il est maintenant bien établi que la fusion entre une cellule tumorale et une cellule normale peut produire dans la cellule hybridée une suppression du phénotype tumoral du parent transformé. À cet égard, des travaux récents de ce laboratoire ont montré que la sensibilité à l'IL1-6 de myélome murin était réactivée suite à la fusion avec des lymphocytes B normaux. Dans ces expériences, nous avons observé que la croissance de certains hybridomes était inhibée par la présence d'un facteur (facteur RO) présent dans le milieu conditionné par des cellules de type monocyte-macrophage. En utilisant une lignée cellulaire sensible au facteur …
Colloque
Les hybridomes de lymphocytes-B sont maintenant couramment utilisés pour produire des anticorps monoclonaux (AcMo). Nous avons mis au point une méthode de sélection qui permet d'isoler des variants d'hybridomes sécrétant des Ac de plus haute avidité. Cette méthode est basée sur le fait que les hybridomes expriment une certaine quantité de l'Ac monoclonal sous une forme membranaire, ce qui leur permet de se lier à l'antigène (Ag) immobilisé. En forçant le détachement des hybridomes de l'Ag, jusqu'à ce qu'un variant perd les variants possédant une avidité accrue pour l'Ag. Jusqu'à présent, la méthode a été testée avec un hybridome sécrétant …
Colloque
Nous avons étudié l'effet des cellules de la lignée monocyte-macrophage sur la croissance des hybridomes obtenus suite à la fusion de lymphocytes B et de cellules d'une lignée de myélome. Les résultats obtenus montrent que le surnageant de culture des macrophages (SC) permet d'obtenir un rendement aussi élevé en hybridomes viables que l'addition de cellules intactes. Cette activité n'est pas perdue lors de la dialyse du SC, mais est détruite par la trypsine, ce qui indique que le facteur actif (HGF) est une protéine de haut P.M. En vue de simplifier la caractérisation de ce facteur, nous avons mis au …
