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Colloque
Lors de travaux sur le pancréas exocrine, Lebel et al. (1980) ont mis en évidence une ecto-enzyme membranaire ayant la propriété d'hydrolyser successivement les groupements γ et β phosphate des tri- et diphosphonucleosides. Cette enzyme appelée ATP-Diphosphohydrolase (ATPDase) a par la suite été caractérisée et localisée, entre autres, au niveau des membranes des grains de zymogène de la cellule acineuse, mais son rôle reste toujours inconnu. Nos travaux visent à identifier la sous-unité peptidique de cette enzyme, capable de lier le substrat (nucléosides). L'identification est réalisée à l'aide du 5'-p-fluorosulfonylbenzoyl adénosine (FSBA), un marqueur capable de former un lien covalent …
Colloque
Les ATPDases sont des ectoenzymes qui hydrolysent les triphosph- et diphosphoncléosides extracellulaires. Jusqu'à présent, ces enzymes ont surtout été mises en évidence dans la paroi des vaisseaux sanguins, soit sur les cellules endothéliales et/ou sur les cellules musculaires lisses vasculaires. Nous présentons pour la première fois une ATPDase dans les muscles lisses non-vasculaires, soit dans la trachée de bœuf. Nous décrivons les caractéristiques de l'enzyme; entre autres la spécificité de substrat, le pH optimum, le Km app., le Vmax app., le poids moléculaire natif évalué à partir d'une courbe d'incorporation par irradiation au 60Co et le comportement de l'enzyme face …
Colloque
Les cellules endothéliales du système circulatoire constituent une barrière dynamique entre le sang et les tissus environnants. Ce sont des cellules à fonctions multiples. Elles participent aux phénomènes de coagulation, d'angiogenèse, de régulation du tonus vasculaire... Ces cellules sont exposées directement aux produits transportés dans le sang. Le but de notre travail était d'étudier l'influence des acides gras libres sur la viabilité et la croissance des cellules endothéliales. Pour cela, des cellules endothéliales de l'aorte de boeuf ont été exposées à des concentrations physiologiques de certains acides gras saturés et insaturés pendant cinq jours. La croissance de ces cellules n'était …
Colloque
Nous avons récemment décrit une ecto-ATP-diphosphohydrolase (ecto-ATPDase) de l'aorte de boeuf qui catalyse l'hydrolyse successive des groupements γ et β phosphate des triphospho- et diphosphoncléosides. Cet ATPDase est retrouvée à la surface des cellules endothéliales et musculaires lisses et pourrait jouer un rôle majeur dans l'agrégation plaquettaire et la coagulation. L'ATPDase isolée de la couche média de l'aorte de boeuf est différente de celle du pancréas décrite en 1980. Nos travaux visent à purifier cet enzyme à identifier sa sous-unité catalytique. Une technique de purification consiste à préparer un homogénat de la couche média et intima de l'aorte de boeuf, …
Colloque
Les nucléotides sanguins sont impliqués au niveau de la régulation du tonus vasculaire et au niveau de la coagulation sanguine (agrégation des plaquettes sanguines). Le niveau de nucléotides dans le sang serait contrôlé par plusieurs enzymes comprenant entre autres des ATPases et ADPases retrouvées aux niveaux des cellules sanguines et des cellules vasculaires. Récemment, nous avons confirmé la présence d'une ATP-diphosphohydrolase au niveau de l'aorte de bœuf. Cet enzyme est capable d'hydrolyser les diphospho- et triphosphonucleosides. Compte tenu de la localisation stratégique de cet enzyme et de ses propriétés cinétiques (pH optimal 7.5, Km 15mM), nous proposons que cette nouvelle …
Colloque
Les nucléotides sanguins sont impliqués au niveau de la régulation du tonus vasculaire et au niveau de la coagulation sanguine (agrégation des plaquettes sanguines). Le niveau de nucléotides dans le sang serait contrôlé par plusieurs enzymes comprenant entre autres des ATPases et ADPases retrouvées aux niveaux des cellules sanguines et des cellules vasculaires. Récemment, nous avons confirmé la présence d'une ATP-diphosphohydrolase au niveau de l'aorte de bœuf. Cet enzyme est capable d'hydrolyser les diphospho- et triphosphonucleosides. Compte tenu de la localisation stratégique de cet enzyme et de ses propriétés cinétiques (pH optimal 7.5, Km 15mM), nous proposons que cette nouvelle …
Colloque
Les ATP-diphosphohydrolases (ATPdases) sont des enzymes capables d'hydrolyser les triphospho- et les diphosphonucleotides. Ils ont été isolés de la pomme de terre, des insectes piqueurs-suceurs, ainsi que dans le foie, le pancréas et l'aorte des mammifères. Ce sont des ectoenzymes; ce qui signifie que leur actif est exposé à la surface de la cellule. Compte tenu que leur opt pH correspond au pH extra-cellulaire et que leur Km est très bas (21 µm dans le foie, 7 µm dans le pancréas et 15 µm dans l'aorte), ces ectonucleotidases pourraient réguler de façon efficace les niveaux de nucléotides extracellulaires. Nous présentons …
Colloque
Les nucléotides sanguins sont impliqués dans le phénomène de coagulation (ADP dans l'agrégation plaquettaire et dans la contraction des muscles lisses des vaisseaux sanguins). Certaines enzymes peuvent convertir l'ATP, un puissant vasoconstricteur en AMP et adénosine, de puissants vasodilatateurs. On sait d'autre part que certains nucléotides peuvent causer la sécrétion de facteurs vasodilatateurs par les cellules endothéliales (EDRF). Nous avons mis en évidence sur des cellules cultivées in vitro, une ou des enzymes qui hydrolysent l'ATP, l'ADP et d'autres diphosphonucléosides. Nos résultats montrent que l'activité d'hydrolyse est localisée à la surface des cellules. Nous avons déterminé les paramètres cinétiques de …
