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Colloque
En 1980, une nouvelle structure de nature lysosomale a été mise en évidence par des méthodes cytochimiques au niveau du pancréas exocrine de rat. Cette structure présente un aspect morphologique tubulaire et se trouve dans la région basale de la cellule. Cette structure a été nommée provisoirement tubule basal ou "snake-like". Son rôle physiologique demeure mal défini. L'isolement et la caractérisation de ces structures constituent une démarche logique pour déterminer leur rôle physiologique au niveau du pancréas. Nous avons développé une méthode de purification de ces organites par ultracentrifugation sur gradient de sucrose. Nous avons obtenu une fraction enrichie 16 …
Colloque
Les cellules endothéliales du système circulatoire constituent une barrière dynamique entre le sang et les tissus environnants. Ce sont des cellules à fonctions multiples. Elles participent aux phénomènes de coagulation, d'angiogenèse, de régulation du tonus vasculaire... Ces cellules sont exposées directement aux produits transportés dans le sang. Le but de notre travail était d'étudier l'influence des acides gras libres sur la viabilité et la croissance des cellules endothéliales. Pour cela, des cellules endothéliales de l'aorte de boeuf ont été exposées à des concentrations physiologiques de certains acides gras saturés et insaturés pendant cinq jours. La croissance de ces cellules n'était …
Colloque
Lors de travaux sur le pancréas exocrine, Lebel et al. (1980) ont mis en évidence une ecto-enzyme membranaire ayant la propriété d'hydrolyser successivement les groupements γ et β phosphate des tri- et diphosphonucleosides. Cette enzyme appelée ATP-Diphosphohydrolase (ATPDase) a par la suite été caractérisée et localisée, entre autres, au niveau des membranes des grains de zymogène de la cellule acineuse, mais son rôle reste toujours inconnu. Nos travaux visent à identifier la sous-unité peptidique de cette enzyme, capable de lier le substrat (nucléosides). L'identification est réalisée à l'aide du 5'-p-fluorosulfonylbenzoyl adénosine (FSBA), un marqueur capable de former un lien covalent …
Colloque
Nous avons récemment décrit une ecto-ATP-diphosphohydrolase (ecto-ATPDase) de l'aorte de boeuf qui catalyse l'hydrolyse successive des groupements γ et β phosphate des triphospho- et diphosphoncléosides. Cet ATPDase est retrouvée à la surface des cellules endothéliales et musculaires lisses et pourrait jouer un rôle majeur dans l'agrégation plaquettaire et la coagulation. L'ATPDase isolée de la couche média de l'aorte de boeuf est différente de celle du pancréas décrite en 1980. Nos travaux visent à purifier cet enzyme à identifier sa sous-unité catalytique. Une technique de purification consiste à préparer un homogénat de la couche média et intima de l'aorte de boeuf, …
Colloque
Les ATPDases sont des ectoenzymes qui hydrolysent les triphosph- et diphosphoncléosides extracellulaires. Jusqu'à présent, ces enzymes ont surtout été mises en évidence dans la paroi des vaisseaux sanguins, soit sur les cellules endothéliales et/ou sur les cellules musculaires lisses vasculaires. Nous présentons pour la première fois une ATPDase dans les muscles lisses non-vasculaires, soit dans la trachée de bœuf. Nous décrivons les caractéristiques de l'enzyme; entre autres la spécificité de substrat, le pH optimum, le Km app., le Vmax app., le poids moléculaire natif évalué à partir d'une courbe d'incorporation par irradiation au 60Co et le comportement de l'enzyme face …
Colloque
Les nucléotides sanguins sont impliqués dans le phénomène de coagulation (ADP dans l'agrégation plaquettaire et dans la contraction des muscles lisses des vaisseaux sanguins). Certaines enzymes peuvent convertir l'ATP, un puissant vasoconstricteur en AMP et adénosine, de puissants vasodilatateurs. On sait d'autre part que certains nucléotides peuvent causer la sécrétion de facteurs vasodilatateurs par les cellules endothéliales (EDRF). Nous avons mis en évidence sur des cellules cultivées in vitro, une ou des enzymes qui hydrolysent l'ATP, l'ADP et d'autres diphosphonucléosides. Nos résultats montrent que l'activité d'hydrolyse est localisée à la surface des cellules. Nous avons déterminé les paramètres cinétiques de …
Colloque
Par une technique de cryosubstitution nous avons mis en évidence des microvésicules au niveau de la lumière des acini exocrines. Nous avons par la suite isolé ces microvésicules à partir du pancréas de rat et du porc collecté in vivo. Les études en cryo-décapage nous ont révélé que la membrane était dépourvue de protéines transmembranaires. Ces études histochimiques ont aussi démontré que la membrane ne contenait ni sucres ni cholestérol. Par des techniques d'électrophorèse et des techniques immunocytochimiques, nous avons démontré que cette microvésicule contenait une seule sorte de protéine, Rac 1, une glycoprotéine des cellules acinaires. Nous tentons maintenant …
Colloque
Le surfactant pulmonaire est composé d'environ 90% de lipides et de 10% de protéines. Contrairement à la fraction lipidique, celle incluant les protéines a beaucoup moins été étudiée. Notre étude porte sur les corrélations entre la biosynthèse des protéines et celle des lipides dans les cellules bronchio-alvéolaires. Des poumons de rats adultes ont été perfusés avec des milieux de Krebs Ringer phosphate (KRP) et avec des HBSS sans Ca++ ni Mg++. Un osmète été préservé pour chaque tranche, et les tranches de poumon ont été incubées dans un tampon KRP supplémenté en acides aminés et glucose. Nos résultats montrent que …
