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Colloque
La transplantation de myoblastes normaux dans des muscles dystrophiques est une voie thérapeutique envisagée pour le traitement de la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD). Le succès de ces greffes est toutefois limité par le système immunitaire. Ce rejet pourrait être contré en transplantant au patient ses propres cellules myogéniques transfectées avec le gène de la dystrophine, mais il a été démontré que les myoblastes d'un patient DMD âgé de plus de 4 ans ne prolifèrent presque plus en culture (Blau et al., 1990). La modification génétique de fibroblastes dermiques à l'aide d'un vecteur rétroviral codant pour un gène impliqué dans …
Colloque
Des cultures de myoblastes primaires ont été infectées avec un vecteur rétroviral (LIXSN) contenant le gène du facteur IX humain (FIXh) sous le contrôle d'un promoteur 5'-LTR. Ces myoblastes ont été transplantés dans les Tibialis anterior de souris Balb/C et CD1, immunosupprimées au FK 506 quotidiennement. Quelques souris ont reçu le jour précédant la greffe, une injection d'anticorps monoclonal contre la molécule d'adhésion LFA-1. Ce traitement a déjà montré dans le passé qu'il réduisait la mortalité des cellules transplantées causée par une réaction inflammatoire. La sécrétion de FIXh a été détectée par ELISA dans le plasma de toutes les souris …
Colloque
Plusieurs myopathies pourraient être éventuellement traitées par la transplantation de myoblastes. Cependant, cette approche nécessite d'énormes quantités de ces cellules qui doivent en plus garder la propriété de fusionner aux fibres musculaires de l'hôte. L'immortalisation de ces précurseurs myogéniques a donc été suggérée pour augmenter leur capacité proliférative. Nous avons voulu examiner le comportement de myoblastes immortalisés suite à leur transplantation. Pour ce faire, plusieurs cultures primaires de muscle ont été obtenues de différentes espèces animales et subséquemment transfectées avec l'antigène T. La fusion in vitro des clones résultants a ensuite été vérifiée. Seuls les clones fusionnant correctement in vitro …
Colloque
La transplantation de myoblastes est une approche potentielle pour le transfert de gènes dans le muscle. Cependant son efficacité dépend du nombre de copies génomiques du donneur pouvant être incorporées à long terme dans le tissu de l'hôte. Les méthodes nécessitant l'incorporation de nucléotides radioactifs ou de composés fluorescents dans les cellules greffées ne permettent pas de mesurer l'influence de la prolifération cellulaire dans les jours suivants la greffe. Alors que la mesure de l'activité enzymatique amenée par des transgènes introduits dans les cellules est facilement perturbée par des variations transcriptionnelles indépendantes du nombre de cellules. Des myoblastes mâles furent …
Colloque
Des travaux récents effectués par Shimizu et al. (Biomedical Research 10, 405, 1989) montrent qu'il y a une accumulation de dystrophine aux jonctions neuromusculaires (J.N.M.s). Nous avons étudié la présence de dystrophine aux J.N.M.s de la souris femelle hétérozygote mdx. Diverses observations en microscopie optique suggèrent que cette protéine peut être localisée non seulement dans la membrane postsynaptique de la J.N.M. mais aussi à la terminaison nerveuse. Cependant, une étude subséquente en microscopie électronique chez la souris normale a montré que la dystrophine est accumulée seulement au niveau des replis synaptiques de la J.N.M. De plus, on observe que cette …
Colloque
La dystrophie musculaire de Duchenne est une maladie dégénérative des muscles striés squelettiques et du muscle cardiaque. Le phénotype est apparent dès l'âge de deux ans et est généralement fatal dans la vingtaine. La nécrose et la fibrose remplacent le tissu dystrophique à l'intérieur des fibres musculaires du patient. La transplantation de myoblastes provenant d'un individu normal à l'intérieur des muscles des jeunes dystrophiques s'avère une thérapie possible. En effet, l'hybridation musculaire normal - dystrophique permettrait la correction du phénotype (Partridge et al., Nature 1989; 337: 176). Afin d'obtenir un marquage permanent de nos cellules normales greffées, la transfection d'un …
Colloque
Karpati et al. (Am. J. Pathol. 135, 27, 1989) ont récemment démontré que la fusion in vivo entre clones de myoblastes humains normaux et myoblastes murins dystrophiques (mdx) permet la correction partielle du phénotype dystrophique. Nos travaux confirment que l'injection de myoblastes humains produit de la dystrophine dans les fibres hybrides (humain-souris). Cependant cette greffe déclenche aussi une forte réaction immunitaire, détectée par immunohistochimie et par cytofluorométrie, chez toutes les souris non-traitées à la cyclosporine A. Cette observation, en contradiction avec celles de Karpati, indique que la transplantation de myoblastes peut engendrer une réponse immunitaire et, dans ce cas, les …
Colloque
Un des traitements potentiels pour diminuer la dégénérescence musculaire caractéristique à la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est la thérapie de transfert de myoblastes. Ce traitement consiste à injecter des myoblastes normaux d'un donneur à l'intérieur des muscles d'un patient DMD. Un des principaux problèmes de ce traitement est d'obtenir une culture pure de myoblastes sans contamination de d'autres types de cellules, principalement des fibroblastes. Une des techniques qui peut être utilisée est une purification par cytométrie de flux d'un marqueur cellulaire spécifique. Blau (1988) a réussi avec l'anticorps 5.1. H11 spécifique aux myoblastes (Walsh 1985) et un "cell sorter" …
Colloque
Des travaux effectués par Law et al. (1989) sur des greffes de myoblastes dans des souris dystrophiques dy2J se sont avérés très encourageants quant aux possibilités d'une thérapie par transplantation de myoblastes pour contrer la dystrophie musculaire de Duchenne. La dystrophine est absente des sujets atteints de dystrophie musculaire de Duchenne et l'absence d'une protéine membranaire, la dystrophine, joue un rôle dans le maintien de l'intégrité membranaire. En culture, des myoblastes normaux et dystrophiques fusionnent pour former des myotubes hybrides. L'utilisation d'un marqueur nouveau de souris granuleux et ceux de rat uniformément a permis de bien identifier les myotubes hybrides, …
Colloque
Jusqu’à présent, la formation de myotubes hybrides a été démontrée grâce à la présence d’isoenzymes hybrides. Cette technique permet d’établir quel pourcentage des fibres sont hybrides, mais ne permet pas de savoir quelles sont les fibres hybrides ni quel est le ratio de noyaux normaux et dystrophiques (N/D) assurant la restauration des fonctions de la fibre hybride. Nos expériences ont été faites à l’aide de cultures de myoblastes de souris C57 BI/101 normaux (+/+) et dystrophiques (mdx/mdx). Les myoblastes normaux ont été cultivés 48 h en présence de 1µM de 5-Bromo 2-Déoxyuridine (BrdU), substrat analogue à la thymidine, et ont …
