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Colloque
Nous avons récemment mis en évidence un total de 39 introns du groupe I dans le gène codant pour la grande sous-unité de l'ARN ribosomique chloroplastique de 17 algues vertes unicellulaires appartenant au genre Chlamydomonas. Ces introns représentent 12 positions d'insertion distinctes et sont distribués de manière très irrégulière. Dans l'étude que nous présentons ici, nous avons déterminé si la composition en intron du gène codant pour la petite sous-unité de l'ARN ribosomique chloroplastique (SSU) est aussi variable. Dans le but d'identifier et de localiser les introns, nous avons amplifié, par réactions PCR, les gènes SSU de 14 espèces de …
Colloque
Comme c'est le cas pour tous les marqueurs génétiques chloroplastiques dans les croisements intraspécifiques chez Chlamydomonas reinhardtii, la plupart des marqueurs polymorphiques entre les ADN chloroplastiques de C. eugametos et C. moewusii sont préférentiellement transmis par le parent mt+ dans les croisements interspécifiques entre ces algues. Cependant, trois marqueurs polymorphiques, représentant des séquences optionnelles, sont transmis à la totalité de la progéniture, même s'ils proviennent du parent mt-. Il s'agit du cinquième intron dans le gène codant pour la grande sous-unité de l'ARN chloroplastique de C. eugametos, et des séquences de 6 et 21 kilopaires de bases (kpb) de C. …
Colloque
C. moewusii possède un ADN linéaire de 6 kb dont la séquence existe aussi sous forme intégrée dans le génome chloroplastique de cette algue. Bien que sa fonction demeure inconnue, la séquence de 6 kb ne semble pas essentielle à la survie de la cellule puisqu'elle s'épanouit différemment et augmente son état déployé. Dans le but de déterminer comment cette séquence est maintenue sous forme libre dans la cellule, nous avons étudié la séquence de la région de 6 kb intégrée dans le plasmopool hybride et sa conversion entre c. augmentes et c. moewusii. Nous avons observé que, dans tous …
Colloque
Les introns du groupe I sont capables de s'autoépisser en l'absence de protéines et forment une famille montrant une distribution étendue, mais irrégulière chez des organismes phylogénétiquement très divergents. Une telle distribution peut s'expliquer par la capacité de ces introns à s'insérer et s'exciser des gènes cibles. La base moléculaire d'un phénomène de mobilité d'intron de groupe I, appelé "intron homing", a été récemment rapporté dans la littérature. Nous tentons maintenant de mettre en évidence la transposition d'introns d'un gène cible à un autre, un type de mobilité qui n'a pas encore été confirmé expérimentalement. Pour atteindre cet objectif, nous …
Colloque
Notre récente comparaison des génomes chloroplastiques des algues interfécondes C. eugametos et C. moewusii a révélé une différence de délétion/addition de 21 kilopaires de bases (kpb) dans le voisinage du gène codant pour la protéine de 32 kilodaltons du photosystème II (psbA) (Lemieux et al. (1985) Plant Mol. Biol. 5: 77-84). Dans l'étude que nous présentons ici, les gènes psbA des deux algues ont été séquencés et comparés afin de déterminer la position précise de la différence de 21 kpb par rapport à celle de psbA. Comme chez les plantes supérieures, le gène de C. eugametos est continu. Par contre, …
Colloque
Un fragment de 10.18 kb du DNA chloroplastique de l'algue unicellulaire C. moewusii a été analysé (clone CMo1), afin de détecter la présence de nouveaux gènes chloroplastiques. L'expression du DNA de ce clone dans le système hétérologue de transcription-traduction S-30, a été analysée par des enzymes de restriction, les hybridations sur support solide avec polyA+ et poly A- de deux états différents (lumière et obscurité) avec les sous fragments du clone, ainsi que l'hybridation avec le clone de l'algue C. reinhardtii contenant le gène psal (qui nous permettrait de localiser le même gène). Ce dernier contient un des fragments de …
Colloque
La comparaison de l'organisation globale de l'ADN chloroplastique de Chlamydomonas reinhardtii et Chlamydomonas moewusii a montré que des réarrangements majeurs de séquence ont eu lieu au cours de l'évolution de ces deux algues vertes unicellulaires (Lemieux et al., Biosystems, in press). Ces résultats suggèrent que les deux lignées d'algues ont divergé depuis très longtemps. Afin d'évaluer l'importance de cette divergence, nous avons déterminé la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S du chloroplaste de C. moewusii et comparé la séquence avec celle déjà publiée (Rochaix et al., Nucl. Acids Res., 239, 760-769) de C. reinhardtii. Une comparaison détaillée des plusieurs …
Colloque
Les sites de coupure des endonucléases de restriction AvaI, BstEII et EcoRI ainsi que les positions des gènes codant pour les ARNs ribosomiques chloroplastiques 16S et 23S et pour cinq polypeptides ont été localisés sur l'ADN chloroplastique (ADN-cp) de l'algue verte unicellulaire Chlamydomonas moewusii. La stratégie utilisée pour construire la carte physique a consisté à cloner les fragments de restriction EcoRI de l'ADN-cp dans pBR322, à cartographier chacun des fragments clonés par digestions multiples et enfin à ordonner ces fragments par hybridation aux transferts "Southern" des digestions AvaI et BstEII de l'ADN-cp. La carte ainsi construite a une grandeur de …
Colloque
Afin de comparer l'organisation globale des séquences sur les génomes chloroplastiques des algues vertes unicellulaires Chlamydomonas reinhardtii et Chlamydomonas eugametos, nous avons hybridé des fragments de restriction, dont les positions sont connues sur l'ADN chloroplastique (ADN-cp) de l'une ou l'autre de ces algues, à des transferts "Southern" de digestions d'ADNs-cp. Cette comparaison nous indique que l'arrangement des séquences homologues diffère considérablement chez les deux algues. Des études similaires effectuées chez des plantes terrestres ont révélé une remarquable conservation de l'arrangement des séquences communes à l'ADN-cp de ces plantes. Pour expliquer le contraste entre ces résultats et les nôtres, nous favorisons …
Colloque
Nous avons mis au point une technique d'immunoprécipitation sélective de fragments d'ADN possédant un ou plusieurs promoteurs de nature procaryotique. L'ARN-polymérase ADN-dépendante de E. coli est incubée avec des fragments de restriction d'ADN dans un milieu réactionnel favorable à la formation de complexes ADN-ARN polymérase. Ces complexes sont ensuite immunoprécipités à l'aide d'un anticorps polyclonal spécifique dirigé contre l'ARN polymérase en présence de protéine A liée à des billes de Sepharose. Des lavages successifs des immunoprécipités permettent d'éliminer les fragments de restriction qui n'ont pas fixé la polymérase. Les fragments d'ADN engagés dans ces complexes sont finalement libérés par ébullition …
