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Communication
Pseudomonas aeruginosa est une bactérie opportuniste et ubiquitaire possédant une résistance élevée aux antibiotiques. La STM (signature-tagged mutagenesis) est une méthode qui a été développée afin d’identifier les gènes responsables de la virulence d’une bactérie. À l’aide de cette technique, 148 gènes ont été reconnus comme étant essentiels au maintien de l’infection de P. aeruginosa chez le rat. Nous avons choisi de nous intéresser au gène, essentiel in vivo, PA3826 produisant une protéine membranaire de fonction inconnue de 165 acides aminés et convenant aux études de RMN solide. Nous avons tout d’abord synthétisé des amorces spécifiques au gène PA3826 contenant …
Communication
Pseudomonas aeruginosa (PA) est un pathogène opportuniste causant des infections secondaires chez les personnes atteintes de mucoviscidose. La mutagénèse avec étiquettes d’ADN uniques ("PCR-based signature tagged mutagenesis" (PBSTM)) permet d’identifier des gènes essentiels à l’initiation et/ou au maintient de l’infection. Dans cette méthode, l’identification de gènes essentiels in vivo se fait par sélection phénotypique négative. La PBSTM originale utilise 12 mini-Tn5s pour construire 12 banques de mutants avec étiquettes. Ces mutants peuvent être criblés par groupe de 12. En utilisant la PBSTM, nous avons criblé 1 056 mutants de PA et identifié 13 mutants atténués. Le niveau d’atténuation de ces …
Communication
Les gènes Mur responsables des étapes cytoplasmiques de la biosynthèse du peptidoglycan sont tous des gènes essentiels et des cibles thérapeutiques potentielles. Cependant, il n’existe aucun antibiotique utilisé en clinique qui interfère avec les enzymes Mur. Les gènes murA-F ont été sousclonés dans le vecteur pET. MurA-F ont été surexprimées dans E. coli. Les protéines ont été purifiées via leur étiquette 6X His en C-terminale par une seule étape de chromatographie sur une colonne d’affinité chargée au Ni2+. Deux banques de phages M13 ont été criblées contre MurC. Ces banques expriment 3-4 x 10^9 séquences peptidiques aléatoires fusionnées à la …
Colloque
Pseudomonas aeruginosa (PA) est un pathogène opportuniste causant des infections secondaires graves chez les personnes atteintes de mucoviscidose. Plusieurs facteurs de virulence de PA ont été identifiés, mais leur importance respective dans le mécanisme d’initiation et/ou de maintien de l’infection n’a pas été démontrée. Nous avons développé une nouvelle méthode permettant d’identifier des gènes essentiels à l’initiation et/ou au maintien de l’infection par PA. Cette méthode découle de la mutagénèse avec étiquettes uniques ("signature tagged mutagenesis" (STM)) où l’identification de gènes essentiels in vivo se fait par sélection phénotypique négative. C’est une méthode qui comporte plusieurs avantages. Entre autres, elle …
Colloque
Plusieurs micro-organismes possèdent des pompes ayant une faible spécificité à un substrat. Ces organismes sont capables d’expulser des toxines ayant une conformation structurale différente. Ce type de résistance à plusieurs drogues a été nommé pompes à résistances multiples. La pompe EmrAB chez E. coli confère une résistance à des protonophores (carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone [CCCP]) et certains antibiotiques (acide nalidixique, norfloxacin et thiolactomycin). Un homologue de emrAB de E. coli a été identifié chez P. aeruginosa. Suite à un séquençage au hasard d’une banque de P. aeruginosa dans le vecteur pTZ18R, deux recombinants ayant des inserts de 1631 pbs et …
Colloque
Pseudomonas aeruginosa est un pathogène opportuniste responsable de plus de 90 % du taux de mortalité chez les patients atteints de la mucoviscidose. Comme divers microorganismes, P. aeruginosa produit plusieurs facteurs de virulence qui entrainent la colonisation des voies respiratoires de l’hôte. Chez B. pertussis, le pathogène responsable de la coqueluche, il existe un système à deux composantes qui régule l’expression des gènes de virulence. Des homologues des différents domaines des protéines BvgS et BvgA ont été isolés chez P. aeruginosa par la méthode du Pooled Cloned PCR BAC (PCPB) en criblant une banque de P. aeruginosa clonée dans le …
Colloque
L’hydrolyse des antibiotiques par les b-lactamases est le mécanisme le plus commun de résistance aux antibiotiques. Pour combattre cette résistance, il existe des inactivateurs suicides comme le sulbactam, le tazobactam et l’acide clavulanique, qui vont inactiver la b-lactamase. Ces inactivateurs sont efficaces contre les b-lactamases de la classe A. Des mutations ont été effectuées aux positions 75-77 et 216-218 de la b-lactamase PSE-4 en utilisant la mutagenèse par remplacement aléatoire de trois codons. Ceci avait pour but d’étudier les interactions de ces acides aminés avec les inactivateurs suicides. Les mutants ont été sélectionnés sur gélose contenant de l’ampicilline avec sulbactam …
Colloque
Chez les eucaryotes, il y a 2 ARN polymérases qui transcrivent l'ADNr, l'ARN polymérase I transcrit l'unité 18S-5,8S-28S et l'ARN polymérase III transcrit l'ARN5S. Un clone recombinant λZ001 contenant l'unité d'ADNr de T. gondii a été cartographié et séquencé. Par des hybridomes de type Northern et Southern, les sous-unités majeures de l'ADNr furent situées dans un fragment de 9,0 kb. Les unités se retrouvent en tandem tête-à-queue dans l'ordre 18S-5,8S-28S comme chez les eucaryotes. L'ADNr 5S de T. gondii localisé et caractérisé, situation unique chez les eucaryotes, à l'exception de Saccharomyces cerevisiae. Par contre, la direction de transcription du gène …
Colloque
Le gène bla OXA-3 responsable de l'hydrolyse des pénicillines isoxazolyles a été isolé à partir du transposon Tn1417 de Pseudomonas aeruginosa, codant pour la résistance aux aminopénicillines, β-lactamine, chloramphénicol, mercure et sulfamides. Un fragment BamHI-BamHI de 5.3 Kb a été cloné dans pBCG131, puis cartographié avec des endonucléases de restriction. Des sous-clonages dans pBCG1+ et pBCG131 ont localisé le gène bla dans une région de 1.3 Kb. Le séquençage a été réalisé selon la méthode enzymatique. L'analyse de la séquence révèle un cadre de lecture ouvert de 825 pb, codant pour une protéine de 275 acides aminés. L'analyse par ordinateur …
Colloque
Le sporozoaire Toxoplasma gondii, parasite intracellulaire obligatoire infectant l'humain, est un modèle important de biologie moléculaire à cause d'un cycle de vie complexe sexué et asexué. À partir d'une banque génomique dans λZ001, l'ADNr de T. gondii a été isolé dans un fragment Sau3A de 10,0kb. La caractérisation de l'unité transcriptionnelle d'ADNr de 9,0kb (18S-5,8S-28S) contenant un intron dans l'ITS1 a été faite par la méthode enzymatique, à l'aide d'amorces universelles. Les comparaisons des séquences 18S et l'analyse phylogénétique par différentes méthodes statistiques de parcimonie et d'alignement multiples révèlent que T. gondii semble appartenir au dinoflagellé Prorocentrum micans.
