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La méthode consiste à allonger les extrémités 3'-terminales du fragment de DNA par des résidus de AMP ou de dTMP en présence de désoxynucléotidyltransférase terminale. Le plasmide pBR322, linéarisé par une coupure dans le site PstI ou BamII, est allongé par des chaînes complémentaires à celles du fragment. Après hybridation des chaînes complémentaires, on clôture le plasmide recombinant pour transformer la bactérie Y1776. Nous avons obtenu, par cette méthode, des recombinants contenant des fragments exogènes du virus du polynome, ayant conservé certaines propriétés biologiques du virus.
Nous avons construit des recombinants entre le plasmide bactérien pBR322 et le DNA de 3 variants du virus du polyome: (i) A1, un variant à grandes plaques (11) P16 variant à petites plaques et (iii) ts-P155, un mutant thermosensible dérivé de P16. La carte physique de chaque recombinant a été établie par analyse électrophorétique des fragments de restriction sur gel d'agarose. Les plasmides recombinants contenant "l'insert" d'un gène viral non restreint mais uniquement après excision de la séquence colique au moyen d'une enzyme de restriction. Certains recombinants présentent une délétion dans la partie virale. Ils résultent vraisemblablement d'une excision de …
Nous avons construit des recombinants entre le plasmide bactérien pBR322 et le DNA de 3 variants du virus du polyome: (i) A1, un variant à grandes plaques (11) P16 variant à petites plaques et (iii) ts-P155, un mutant thermosensible dérivé de P16. La carte physique de chaque recombinant a été établie par analyse électrophorétique des fragments de restriction sur gel d'agarose. Les plasmides recombinants contenant "l'insert" d'un gène viral non restreint mais uniquement après excision de la séquence colique au moyen d'une enzyme de restriction. Certains recombinants présentent une délétion dans la partie virale. Ils résultent vraisemblablement d'une excision de …