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Analyse fonctionnelle du promoteur du gène de la poly (ADP-ribose) polymérase de souris lors de la différenciation cellulaire
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La poly (ADP-ribose) polymérase (PARP) est une enzyme nucléaire impliquée dans des processus biologiques importants tels la réparation de l'ADN, la prolifération et la différenciation cellulaires. Afin d'identifier les mécanismes régulant l'expression de la PARP de souris, un clone contenant 7.5kb de région promotrice a été isolé à partir d'une banque d'ADN génomique. Sa séquence a permis d'observer que l'organisation structurale du promoteur est celle des promoteurs de type "TATA-less", caractérisés entre autre par l'absence de la boîte TATA et la présence de plusieurs sites d'initiation de la transcription. La technique d'empreinte à la DNase I a permis de déterminer …

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Caractérisation du promoteur du gène de la poly (ADP-ribose) polymérase de souris
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Une quantité sans cesse croissante d’information tend à démontrer que le poly ADP-ribosylation des protéines nucléaires agit sur la réparation et la réplication de l’ADN et modifie l’expression des gènes pendant la différenciation et la transformation cellulaire. Dans le but d’étudier la régulation de l’expression du gène de la poly (ADP-ribose) polymérase (PARP) ou souris pendant la différenciation cellulaire, nous avons isolé un clone génomique contenant une partie du gène et 7,5 kb de la région promotrice. Le site d’initiation de la transcription a été identifié et 2 kb de la région 5’ ont été séquencés. Cette séquence nous a …

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Expression dans E. coli de domaines fonctionnels de la poly(ADP-ribose) polymérase
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La poly(ADP-ribose) polymérase est une enzyme nucléaire qui synthétise, à partir du NAD+, un polymère d'(ADP-ribose) sur différentes protéines telles que l'enzyme elle-même et les histones. Nous avons exprimé séparément chez E. coli des fragments de l'enzyme correspondant à 2 domaines fonctionnels de l'enzyme. Le premier fragment code pour le domaine interne de 36 kDa qui fixe l'ADN. Nous montrons par duvardage "South-Western" que ce polypeptide se fixe et fixe l'ADN mais aussi l'ARN grâce à sa partie C-terminale. Le deuxième fragment surexprimé code pour le domaine de 54 kDa fixant le NAD+. Nous comparons l'expression de ce domaine de …

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Caractérisation d'une séquence d'insertion procaryote présente dans le DNA génomique de Drosophila melanogaster
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Une librairie d'ADN génomique de la Drosophile, construite dans lambda EMBL4, a été criblée en utilisant un proche dérivé de la séquence d'insertion procaryote IS1 comme sonde. Deux clones recombinants ont été isolés dans des conditions strictes d'hybridation. Après avoir confirmé, à l'aide d'enzymes de restriction, que chaque clone contenait effectivement des séquences IS1, nous avons démontré que chacun de ces clones s'hybride à des séquences spécifiques d'ADN génomique de la Drosophile. Ces résultats démontrent pour la première fois, que des séquences génomiques eucaryotes peuvent servir de cibles pour l'insertion d'éléments mobiles procaryotes. De plus, ces conclusions devraient servir d'avertissement …

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