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Colloque
Les rétrovirus sont des virus à ARN très spécialisés, fréquemment impliqués dans l'apparition de cancers. Le rétrovirus Cas-Br-E cause des leucémies thymiques chez la souris NIH. Dans 72% de ces lymphomes, il est intégré dans le gène fli-1, toujours dans une petite région de quelques nucléotides. Une étude récente suggère que la stabilité d'une intégration rétrovirale et le type de maladie qui en résulte peuvent être en partie causés par la présence d'une réaction cancérone avec l'hôte, suscitée par un produit chimique. Ce soulève la question de l'interaction entre l'intégration rétrovirale et l'exposition à des agents mutagènes dans les processus …
Colloque
L'essai clonal permet de quantifier les mutations induites in vivo au locus hprt dans les lymphocytes du sang périphérique. Grâce à cette méthode, un effet mutagène a été démontré chez l'humain, dans un contexte d'exposition thérapeutique ou professionnelle aux radiations ionisantes et aux drogues antinéoplasiques, ou agents reconnus pour causer des atteintes à la santé (e.g., cancer). Plusieurs populations animales sont aussi exposées à des agents génotoxiques dans leur environnement et affichées de cancers fortement suspectés d'être causés par la présence de ces polluants. Certaines espèces étant importantes du point de vue économique (élevages bovins) ou encore pour le maintien …
Colloque
L'hydantoinase (EC 3.5.2.2) est une enzyme stéréospécifique hydrolysant les liaisons C-N des amides cycliques et conduisant à la formation de précurseurs des acides aminés. Elle est retrouvée chez les mammifères, les micro-organismes et les végétaux. Trois sources de légumineuses et les pois verts frais, les cosses de pois verts et un sous-produit tiré des pois secs ont été évalués pour leur activité hydantoinase. Les cosses de pois verts (EPV) en présence du substrat hydantoine évaluant l'activité. L'extraction a été réalisée à l'aide de sodium pH 9.5, 100 mM. Cette enzyme était active sur le substrat à des valeurs de pH …
Colloque
Afin de répondre à une forte demande en acides aminés des industries alimentaires et pharmaceutiques, une méthode de criblage en culture continue pour sélectionner de nouveaux microorganismes producteurs de l'hydantoinase (enzyme impliquée dans la synthèse des acides aminés) a été mise au point. En se servant de Pseudomonas putida DSM 84 comme témoin positif de l'activité de l'hydantoinase en culture discontinue, la thymine fut identifiée comme inducteur de l'hydantoinase. Cette induction fut confirmée en culture continue. En appliquant cette technique, une autre souche de Pseudomonas putida productrice de l'hydantoinase a été sélectionnée à partir d'une population mixte de microorganismes cultivés …
Colloque
Jusqu'à tout récemment, il était impossible de déterminer le spectre complet des changements induits au locus hprt chez des lymphocytes mutants humains HPRT- parce que : 1) la méthode de Southern ne permettait pas de mettre en évidence les délétions de taille inférieure à 6 kb; 2) les mutants ne pouvaient être perdus car leur culture ne permettait pas d'obtenir les 10 millions de cellules nécessaires pour l'extraction de l'ADN et 3) l'amplification sélective (PCR) de l'ADN complémentaire à l'ARNc du gène hprt à partir de lysat cellulaire n'était pas possible à cause de ces problèmes. De plus, Yang et …
Colloque
L'étude des altérations moléculaires induites par des agents de l'environnement est essentielle afin d'établir leur spécificité d'action sur le matériel génétique. L'ozone est un puissant oxydant très répandu dans notre environnement, auquel les humains sont couramment exposés. Nous avons déterminé les altérations moléculaires induites in vitro par l'ozone au locus hprt dans une lignée lymphoblastoïde humaine (TK6). Dans un premier temps, l'ADN de divers mutants a été digéré par l'énonculease de restriction PstI et analysé selon la technique de Southern. Puis, des délétions moléculaires ont été observées consistant en des délétions variant de 6 à 41 Kpb. Ces dommages se …
Colloque
Notre environnement renferme des milliers d'agents mutagènes. Étant donné que les mutations sont à l'origine de cancers, il importe de développer des méthodes de détection précoce d'activité génotoxique chez les humains exposés. Cette détection pourrait exploiter le fait que les agents mutagènes induisent souvent des altérations spécifiques dans l'ADN. Nous avons déterminé les altérations moléculaires induites in vitro au locus hprt dans une lignée cellulaire humaine par différents agents chimiques et physiques reconnus pour leur capacité d'induire une variété de changements (substitutions de base, délétions,...). L'ADN des divers mutants a été digéré par l'endonucléase de restriction Pst1 et analysé selon …
Colloque
L'hydantoinase transforme certains substrats en précurseurs d'acides aminés. Des extraits semi-purifiés testés pour la production de N-carbamyl-beta-alanine (NCBA) ont révélé l'instabilité de l'enzyme. Une façon de pallier ce problème serait d'optimiser et de stabiliser l'activité de l'enzyme provenant de cellules entières de Pseudomonas putida. Celles-ci ont été soumises à divers facteurs tels que la température, la composition ionique du milieu, le pH et divers tampons. Les résultats ont montré que l'activité de l'enzyme était plus stable avec des cellules immobilisées à 30°C dans un tampon Tris-HCl pH 8.0, 1M contenant 10 mM de MgSO4 et 50 mM de FeSO4. Les …
Colloque
La seule méthode de surveillance biologique qui permet la récupération des cellules mutantes humaines obtenues in vivo est la méthode de clonage des lymphocytes T mutants au locus hprt. Les lymphocytes isolés du sang total sont ensemencés dans des microplaques en présence de 6-thioguanine pour sélectionner les mutants et en absence d'agent sélectif pour la détermination de l'efficacité de clonage (EC). La FM se calcule comme le rapport de l'EC avec sélection sur l'EC sans sélection. Par cette méthode, nous avons comparé la fréquence des mutants (FM) chez des travailleurs en chimiothérapie de deux hôpitaux ayant des mesures de protection …
Colloque
Les radiations et divers agents chimiques induisent des mutations dans les cellules de mammifères résultant de dommages induits dans l'ADN cellulaire. Tandis que les radiations ionisantes causent des cassures de brins, l'EMS induit plutôt des modifications de base. Ces altérations de la structure de l'ADN peuvent être mises en évidence par l'étude du polymorphisme de restriction des gènes mutés. Afin de développer cette technique dans notre laboratoire, nous avons préalablement déterminé par un essai clonai la mutagénicité induite au locus hprt de lymphoblastes humains par les radiations ionisantes, l'EMS et l'ozone, un oxydant radioimimétique. Les mutants hprt- ont été sélectionnés …
