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Colloque
Les travaux de notre laboratoire portent sur l'identification des origines de la réplication de l'ADN ainsi que des facteurs cellulaires qui contrôlent leurs activités. Nous avons utilisé plusieurs méthodes différentes pour isoler des origines de la réplication actives de mammifères (chez le singe et l'humain). La détermination de la fonction de ces origines putatives est effectuée par certains tests de réplication dont le test in vivo de la réplication autonome transitoire, le test de persistance à long terme des origines en tant qu'épisomes dans des cellules de mammifères, le test de réplication in vitro, l'examen au microscope électronique de l'ADN …
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Les travaux de notre laboratoire portent sur l'identification des origines de la réplication de l'ADN ainsi que des facteurs cellulaires qui contrôlent leurs activités. Nous avons utilisé plusieurs méthodes différentes pour isoler des origines de la réplication actives de mammifères (chez le singe et l'humain). La détermination de la fonction de ces origines putatives est effectuée par certains tests de réplication dont le test in vivo de la réplication autonome transitoire, le test de persistance à long terme des origines en tant qu'épisomes dans des cellules de mammifères, le test de réplication in vitro, l'examen au microscope électronique de l'ADN …
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Colloque
Les répétitions inverses sont des traits caractéristiques des origines de réplication chez les prokaryotes et eukaryotes. L'extrusion de ces répétitions inverses en cruciformes transitoires a été démontré in vivo. Les cruciformes ont été impliqués dans la régulation de la transcription, la recombinaison et la réplication de l'ADN in vivo. Il a été postulé qu'une protéine se liant spécifiquement aux cruciformes soit impliquée dans la régulation de ces événements. Une protéine (CBP) de poids moléculaire apparent de 66 kDa, capable de se lier spécifiquement aux cruciformes à la jonction croisée de façon indépendante de la séquence a été isolée des extraits …
Colloque
Un chromosome artificiel chez les mammifères a besoin de trois éléments génétiques qui agissent en cis: une origine de réplication de l'ADN, un centromère et des télomères. Le plasmide pYACneo de 15.8 kb contient les éléments de levure ARS, CEN et TEL, ainsi que les marqueurs de résistance d'ampicilline et de néomycine. À partir de ce plasmide, trois origines mammifères de réplication de l'ADN ont été clonées séparément dans le site EcoRI: 343, une origine du chromosome 6q; X24, un élément génétique qui inclus la zone d'initiation de réplication de DHFR chez les hamsters; et S3, une séquence qui peut …
Colloque
Ors12, une origine de réplication de l'ADN précédemment isolée de l'ADN naissant de cellules de singe CV-1, peut se répliquer de façon autonome après transfection dans des cellules HeLa et dans un système in vitro utilisant des extraits de ces mêmes cellules. Elle contient une région a-satellite (~168 nt) ainsi qu'une région non répétitive qui est présente à moins de neuf copies par génome. Ors12 s'associe également à la matrice nucléaire en relation avec le cycle cellulaire. Afin de démontrer que l'initiation de la réplication de l'ADN se situe sur ou près du locus chromosomique de ors12, nous avons généré …
Colloque
Auparavant, nous avons démontré, par analyse de délétion, qu'un fragment de 186 paires de bases (pb) de ors8, une séquence d'ADN mammifère isolée par extrusion de l'ADN naissant de singe au début de la phase S, était la séquence minimale requise pour la fonction de l'origine in vivo et in vitro. p186 contient une répétition inverse imparfaite de 44 pb, un site de liaison imparfait pour le facteur de transcription Oct-1, et plusieurs sites de liaisons pour le facteur de transcription particulier aux erythroïdes, GATA-1. Les sites de liaison des facteurs de transcription servent comme des constituants auxiliaires qui agissent …
