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Colloque
Notre équipe a récemment cloné deux DNA complémentaires codant pour les protéines mPCI et mPC2. Ces deux protéines ont récemment été rapportées comme étant des enzymes capables de couper les prohormones polypeptidiques au pairs d'acides aminés basiques produisant ainsi des hormones biologiquement actives. Afin de caractériser davantage ces deux protéines, nous avons cloné les DNA dans le vecteur pJVN de L.I.'isolement des recombinants de baculovirus devrait alors nous permettre de produire une grande quantité de protéines pouvant atteindre des ng/l de milieu de culture. Nous avons pu purifier ces protéines par affinité à l'aide d'anticorps développés contre la forme recombinante …
Colloque
À l'heure actuelle, un nombre important de techniques nous sont accessibles pour détecter la présence d'enzymes protéolytiques. Les plus couramment utilisées reposent sur l'emploi de courts substrats peptidiques auxquels est attaché un groupement chromogénique ou fluorogénique. Cependant, ces méthodes se révèlent souvent soit trop restrictives ou soit trop complexes et pas assez sensibles. Dans ce contexte, une méthode simple, rapide et sensible a été développée à partir de l'utilisation d'un substrat peptidique radiodé. Une extrémité est immobilisée de manière covalente par une de ses extrémités à une matrice insoluble et comporte à son autre extrémité un groupement radioactif. Deux substrats …
Colloque
La chromogranine B (CgB) fait partie des protéines acides, on la retrouve dans la matrice des granules de sécrétion des cellules neuroendocrines. Le rôle cellulaire et physiologique des chromogranines est encore inconnu malgré la détermination de leur structure moléculaire. Plusieurs observations appuient l'hypothèse que ces molécules seraient impliquées dans le "packaging" des hormones peptidiques dans les granules de sécrétions. En vue d'étudier la fonction de cette protéine, nous avons déterminé la séquence du cDNA de la CgB de souris. Durant le clonage de celle-ci, nous avons isolé une plus petite forme de CgB que nous avons appelée CgB-2 (0.8-Kb) pour …
Colloque
La plupart des peptides/protéines biologiquement actifs sont produits via le clivage d'un précurseur, majoritairement aux paires d'acides aminés basiques. Le 7B2, qui est une protéine de 186 acides aminés, produite et sécrétée par la très grande majorité des cellules endocrines et neuroendocrines, contient tels sites de maturation dans son domaine C-terminal. Dans le but d'étudier cette maturation, nous avons construit un virus vaccinia recombinant qui dirige l'expression du 7B2 dans les cellules infectées. L'analyse des formes immunoréactives de 7B2 produites dans diverses lignées cellulaires, montre que celui-ci est synthétisé sous la forme d'un précurseur de 29 kDa, qui est rapidement …
Colloque
La Plasma Kallikréine (PK) a été proposée, dans notre laboratoire, comme enzyme de maturation potentielle de pro-hormones. Quoique les structures des ADNc du Facteur XI humain et de la PK de rat présentent une homologie de 58%, la PK possède des activités très différentes. Comme la seule séquence génomique connue est celle du Facteur XI humain (Azakari et al), il est important d'établir une étude comparative des gènes de ces deux séries d'enzymes. Par les techniques de biologie moléculaire incluant le PCR la séquence de clones génomiques de la PK de rat, nous avons pu définir la présence de 15 …
Colloque
Le PSP94 fut d'abord isolé du plasma séminal humain. Son expression est localisée au niveau des cellules épithéliales de la prostate. L'isolation de l'ADN complémentaire (ADNc) humain nous a fourni une sonde pour déterminer si le PSP94 était exprimé chez d'autres espèces. Parmi les différentes espèces étudiées (rat, mouton, bouc, singe), seul le singe était positif. Nous avons donc entrepris d'isoler son ADN afin de comparer la structure des PSP94 simien et humain. Une librairie d'ADNc de prostate de singe a été construite et criblée avec la sonde humaine. Plusieurs clones furent isolés et séquencés. Malgré une homologie de 90% …
Colloque
La protéine 7B2 (M_r 21000, pI = 5.2) jouerait un rôle endocrine dans le cerveau et l'hypophyse du fait de sa localisation dans les granules de sécrétion différenciées des cellules et neurones. L'hybridation in situ du 7B2 a été réalisée pendant 16 h à 50°C avec des sondes cRNA (antisense) et mRNA (sense) homologues de 1050 nucléotides, marquées au [35S]-UTP. Le marquage spécifique pour le mRNA 7B2, obtenu après autoradiographie, est observé dans les lobes antérieur et intermédiaire mais pas postérieur de l'hypophyse, plus précisément dans les gonadotropes, les thyréotropes et les mélanotropes, et dans l'hypothalamus d'une collaboration avec des …
Colloque
La chromogranine B (70 kDa) et le 7B2 (21 kDa) sont deux protéines acidiques que l'on retrouve dans les granules de sécrétion d'une grande variété de cellules produisant des hormones peptidiques et/ou neuropeptides. Nous avons dérivé la séquence complète du 7B2 des souris par clonage et séquençage de son ADNc. Un clone partiel d'ADNc de chromogranine B a été aussi obtenu. Ces ADNc ont été utilisés comme sonde pour examiner la distribution des ARNm dans différents tissus et différentes régions du cerveau des souris par buvardage poncé (dot blot) ou par Northern (Northern blot). Les résultats démontrent une superposition extensive …
Colloque
L'immunoréactivité de la protéine sécrétoire 782 est comparée avec celle de la vasopressine et de l'oxytocine dans les cellules du noyau supraoptique et dans les fibres de la neurohypophyse, chez les rats Long Evans normaux et chez les mutants atteints de diabète insipide. Le 782, chez le rat normal, se retrouve aussi bien dans les cellules à oxytocine, que dans celles à vasopressine. En revanche, chez le mutant diabétique, la concentration cellulaire de 782 diminue fortement et elle est absente dans les terminaisons axoniques du lobe postérieur. Aucune diminution marquante du 782 n'est observée dans les péricaryons et les fibres …
Colloque
Le PSP94 (Prostatic Secretory Protein) est une protéine, non glycosylée de 94 acides aminés, sécrétée par l'épithélium prostatique humain. Son cDNA a été récemment cloné et séquencé dans notre laboratoire. Le rôle de cette protéine n'est pas encore connu. Toutefois, il a été observé qu'une préparation de PSP94 peut lier le spermatozoïde et des spermés comme agglutiner les gamètes mâles. Afin de confirmer que cette protéine est non seulement insérée correctement dans le spermatozoïde, nous avons construit un gène hybride capable d'exprimer le PSP94 chez E. coli. Dans ce système d'expression, le cDNA contient, en plus de la séquence codante …
