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Colloque
Certaines études suggèrent que les endothélines (ETs) seraient impliquées dans la pathophysiologie de l'asthme et que le poumon pourrait être un site majeur de modulation des niveaux d'ETs. Les buts de notre étude sont de (1) caractériser l'enzyme de conversion des endothélines (ECE) dans le parenchyme pulmonaire de cobaye et de (2) caractériser les endopeptidases neutres (NEP), responsables de la dégradation des ETs, au niveau du parenchyme de poumon humain et de cobaye. Ces études ont été réalisées dans des bains de trachée. Nos résultats montrent que dans le parenchyme de cobaye, la réponse à la Big ET-1 (10-8 M …
Colloque
Les cellules Foa-Kurloff (FK) sont des cellules mononucléaires de cobaye. Elles présentent une activité "natural killer" (NK) et "natural cytotoxic" (NC) suggérant une appartenance à une population NK chez cette espèce. Des anticorps monoclonaux (Acm) dirigés spécifiquement contre les cellules FK ont été produits selon la technique de fusion membranaire décrite par Köhler et Milstein (1975). Après une fusion, 8 clones sécrétant des Acm spécifiques ont été sélectionnés. Par cytométrie de flux, les Acm marquent 76.1 à 95.4% des cellules FK, en comparaison avec les macrophages et les érythrocytes (0.0%), les éosinophiles (0.0 - 64.4%), les neutrophiles (0.0 - 10.6%), …
Colloque
Les cellules épithéliales non-ciliées des bronches (Clara) ont des caractéristiques morphologiques et cytochimiques suggérant des fonctions sécrétoires et oxydatives. Le but de ce travail était d'étudier le métabolisme de l'acide arachidonique (AA) par des cellules purifiées de poumon de cobaye et mises en culture. Le tissu pulmonaire a été dissocié par digestion enzymatique. Les cellules de Clara ont été isolées par plusieurs étapes de purification (élutriation, gradient de Percoll, adhésion différentielle). Les cellules de Clara purifiées (pureté de 85%) ont été cultivées dans le milieu DMEM/F-12 pendant 5 jours. Les stimulations des cellules de Clara en culture ont entraîné une …
Colloque
L’asthme est essentiellement caractérisé par une bronchoconstriction, une inflammation des voies aériennes et une hyperréactivité bronchique (HRB). Nous avons récemment développé chez le cobaye un modèle d’HRB associé à une hyperéosinophilie pulmonaire (HP), par l’injection de billes de Sephadex. Dans le but de mieux comprendre les mécanismes régulant l’HRB, nous avons testé l’effet de différentes substances pharmacologiques sur l’HRB à l’acétylcholine (ACh) et à l’histamine (His). L’HRB a été mesurée pour ces bases biologiques in vitro, un jour après l’injection des billes. Le tableau suivant indique le pourcentage d’inhibition (−) ou d’augmentation (+) de la réponse après traitement avec l’aspirine …
Colloque
L'infiltration de l'épithélium des voies respiratoires par les éosinophiles, servant à l'origine de l'hypersensibilité bronchique observée durant la première phase asthmatique, est présente chez le cobaye. Pour évaluer l'influence de cette pénétration cellulaire par les éosinophiles sur les cellules épithéliales de la trachée (trachéocytes) et les synthèses de la prostaglandine E2 (PGE2) et de la thromboxane B2 (TxB2), les trachéocytes sont isolés par digestion enzymatique (protocole XXIV; 1961) puis cultivés jusqu'à confluence (environ 5 jours) dans le milieu DMEM/F12. Les éosinophiles sont isolés par lavage bronchoalvéolaire et enrichis sur gradient de Percoll (60%). Nos résultats démontrent que les trachéocytes synthétisent …
Colloque
Les cellules Kurlolf sont des cellules mononucléaires retrouvées chez le cobaye. Récemment, une activité "natural killer" (NK) a été identifiée, suggérant que ces cellules correspondraient à une population NK chez le cobaye. Des hybridomes ont été préparés selon la technique de fusion membranaire au polyéthylène glycol entre des plasmocytes (formés chez la souris sensibilisée aux cellules Kurlolf) et des cellules myéloïdes (NSO; les hybridomes clonés ont été disséminés sur des milieux de cultures sélectifs. La capacité de chacun des clones à produire des Acm dirigés spécifiquement contre des cellules Kurlolf a été mesurée par dosage immuno-enzymatique (EIA). Sur un total …
Colloque
L'endothéline (ET-1) est le plus puissant peptide constricteur des muscles lisses vasculaires et non-vasculaires. Il a été observé que l'ET-1 active l'échange Na+/H+ et amène une augmentation de la cytosolique dans les cellules mésangiales de rat (Simonson et al., 1989). L'objectif est d'étudier le rôle de cet échange ionique dans la réponse contractile induite par l'ET-1 dans la trachée et les bronches de cobaye placées en bains isolés. Les tissus sont préincubés en présence d'antagonistes spécifiques de l'échangeur Na+/H+, soit l'EIPA (5-(n-ethyl-n-isopropyl) et le HMA (5-N, N-hexamethylene-amiloride) (1-10 µM). Nos résultats révèlent que les contractions doses-dépendantes induites par l'ET-1 (1-100 …
Colloque
Le thromboxane A2 (TxA2) est un métabolite de l'acide arachidonique possédant des propriétés pro-agrégante et bronchoconstrictrice. Afin de déterminer les mécanismes d'amplification de ces phénomènes, nous avons étudié l'existence de coopérations cellulaires dans la synthèse du TxA2, entre les plaquettes (P) et les macrophages (M) ou les éosinophiles (E) ou les cellules de Foà-Kurloff (FK) de cobaye. La co-stimulation des P (1 x 10^9 P/ml) avec 1,2 et 6 x 10^6 M/ml par l'ionophore A23187 (5µM) a induit une augmentation de la synthèse de TxA2 (comparée à la somme des synthèses individuelles de cellules stimulées), de 58, 35 et 55%, …
Colloque
L'action myotrope du leucotriène C4 (LTC4) au niveau des voies respiratoires est influencée par les cellules épithéliales (trachéocytes). Nous avons caractérisé la liaison spécifique du LTC4 sur les trachéocytes purifiés de cobaye en variant certaines conditions expérimentales. Les cellules incubées à 25°C en présence de sérine borate (80 mM) dans des essais de liaison classique. L'augmentation de la concentration sodique (0-100 mM) favorise la liaison du LTC4 à son récepteur. Le calcium (0-3 mM) augmente l'affinité du LTC4 pour son récepteur, mais à plus fortes concentrations (3-10 mM) on observe une inhibition. Le magnésium à forte concentration (10 mM) favorise …
Colloque
Les mécanismes de l'hyperréactivité bronchique (HRB) sont définis. Afin de comprendre le rôle joué par les éosinophiles dans l'HRB, nous avons créé un modèle in vivo d'HRB chez le cobaye associé à une hyper-éosinophilie, par injection intraveineuse de billes de Séphadex. L'HRB a été mesurée in vitro sur le parenchyme pulmonaire (PP), la bronche principale (BP) et la bronche interne (BI) d'animaux traités et certains en réponse à différentes concentrations d'histamine (H) et d'acétylcholine (A). L'HRB a été évaluée 1, 7 et 14 jours après l'injection, par le pourcentage d'augmentation de la contraction maximale (voir tableau, * p < 0.01).
