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Colloque
Depuis plus d’une décennie, notre groupe s’intéresse à la compréhension des bases moléculaires de la fonction du récepteur AT1 (AT1-R) de l’angiotensine-II (Ang-II). L’accumulation d’une grande quantité de résultats biochimiques visant la caractérisation du site de liaison de l’Ang-II sur l’AT1-R et un mutant constitutivement actif par photomarquage et SCAM nous place dans une position avantageuse pour développer des modèles 3D du récepteur dans ses formes inactive et active. Nous présenterons nos récent progrès dans l’élaboration ces modèle et la compréhension des bases moléculaire menant à l’activité constitutive du mutant N111G.
Colloque
Le CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide) est un neuropeptide de 37 acides aminés présent au niveau du système nerveux central et périphérique. Ses effets biologiques sont variés : vasodilatation, accélération de l'activité cardiaque, inhibition de la sécrétion gastrique, etc. Des études préliminaires au niveau des cellules glomérulées du cortex surrénalien montrent que le CGRP inhibe la sécrétion d'aldostérone induite par l'Angiotensine II (AII). Dans la présente étude, nous démontrons l'existence de sites de liaison spécifiques pour le CGRP au niveau du cortex surrénalien de bœuf. La liaison de 125-I-Tyr0-CGRP est rapide, atteint un équilibre en 45 min à 0°C. La …
Colloque
L'action myotrope du leucotriène C4 (LTC4) au niveau des voies respiratoires est influencée par les cellules épithéliales (trachéocytes). Nous avons caractérisé la liaison spécifique du LTC4 sur les trachéocytes purifiés de cobaye en variant certaines conditions expérimentales. Les cellules incubées à 25°C en présence de sérine borate (80 mM) dans des essais de liaison classique. L'augmentation de la concentration sodique (0-100 mM) favorise la liaison du LTC4 à son récepteur. Le calcium (0-3 mM) augmente l'affinité du LTC4 pour son récepteur, mais à plus fortes concentrations (3-10 mM) on observe une inhibition. Le magnésium à forte concentration (10 mM) favorise …
Colloque
La bradykinine (BK) est un nonapeptide endogène qui active deux récepteurs différents soit B1 et B2. Nous avons montré que le site de liaison de (type B2) de la [125I-Tyr0]BK aux membranes de muscles lisses était identique à celui présent sur les membranes épithéliales (Kd = 2 nM, Bmax = 156 fmol/mg) de l'iléon de cobaye. La D-Arg[Hyp2, D-Phe7,Leu8] BK possède une bonne affinité (Kd = 34.5 nM) pour les récepteurs présents sur ces tissus. L'ajout d'une tyrosine (N-terminale) a permis l'iodation de cet antagoniste du récepteur B2, sans modifier son affinité. Des études de saturation sur des membranes épithéliales …
Colloque
L'angiotensine II (AII) est une hormone régulatrice majeure de la synthèse et de la sécrétion d'aldostérone au niveau des cellules glomérulées de la surrénale. L'AII agit en activant un récepteur spécifique qui, par l'intermédiaire d'une protéine G, stimule la phospholipase C. La phospholipase C est responsable de la production de l'inositol 1,4,5-trisphosphate et du diacylglycérol. Au cours de nos études, nous avons observé que le polyvinyl sulfate (PVS), un polyanion, inhibe la liaison de l'AII à son récepteur membranaire du cortex surrénalien. La concentration qui inhibe 50% de la liaison du 125I-AII (IC50) est de 63.5 ± 12 nM (moyenne …
Colloque
L'inositol 1,4,5-triphosphate (IP3) est un second messager responsable de la libération de Ca++ d'un réservoir intracellulaire dont la nature est encore mal connue. Afin de caractériser ce réservoir, les activités de séquestration et de libération de Ca++ par des microsomes de cortex surrénalien bovin furent étudiées au moyen de l'indicateur fluorescent Fura-2. En présence de Mg++ (2 mM), le Ca++ est emmagasiné de façon très efficace par une activité dépendante de l'ATP, faisant passer le niveau ambiant de Ca++ de 450 nM à environ 135 nM. L'addition d'IP3 (2 µM) libère une partie du Ca++ emmagasiné, qui par la suite …
Colloque
L'importance du calcium dans les mécanismes cellulaires de contraction et de sécrétion est reconnue depuis longtemps. En absence de calcium ou lorsque les canaux calciques sont bloqués, l'action de nombreuses hormones ou neurotransmetteurs est inhibée. Ces hormones, communément appelées "hormones mobilisant le calcium", utilisent un mécanisme qui a été élucidé au cours des dernières années grâce, entre autres, aux travaux de Robert Mitchell et Michael Berridge. En bref, ces hormones reconnaissent un récepteur spécifique (à la surface des cellules cibles) qui, par l'intermédiaire d'une protéine G, active la phospholipase C. Cette phosphodiestérase hydrolyse un phospholipide membranaire pour produire l'inositol 1,4,5-trisphosphate …
