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Nous présentons l'établissement des conditions expérimentales d'un système de reconstitution membranaire dans le cadre d'études électrophysiologiques de la membrane apicale du tubule distal. Nous avons soumis le système de reconstitution des contraintes d'optimisation des évènements ionofuges de protéoliposomes avec la bicouche plane, de longévité du système reconstitué, et de flexibilité aux changements de milieu des phases aqueuses adjacentes à la membrane plane. En bref, on obtient qu'un prétraitement à la trioleine et l'utilisation de phospholipides moins insaturés (POPC et POPE) améliore la survie de la membrane plane de plusieurs heures. Aussi, le rendement de la fusion est optimisé par la …
Nous présentons l'établissement des conditions expérimentales d'un système de reconstitution membranaire dans le cadre d'études électrophysiologiques de la membrane apicale du tubule distal. Nous avons soumis le système de reconstitution des contraintes d'optimisation des évènements ionofuges de protéoliposomes avec la bicouche plane, de longévité du système reconstitué, et de flexibilité aux changements de milieu des phases aqueuses adjacentes à la membrane plane. En bref, on obtient qu'un prétraitement à la trioleine et l'utilisation de phospholipides moins insaturés (POPC et POPE) améliore la survie de la membrane plane de plusieurs heures. Aussi, le rendement de la fusion est optimisé par la …
Nous présentons l'étude du processus d'orientation d'une sonde de fluorescence, le 12-9(AS), dans une monocouche de DPPC à l'interface air/solution. Ce processus est représenté par un paramètre d'orientation qui provient du rapport de deux constantes de diminution de la sonde obtenue par polarisation croisée de la lumière d'excitation. Ce paramètre d'orientation montre trois régions de configurations orientionnelles lors de la compression du film de DPPC. Ces régions sont séparées par deux changements abrupts du paramètre, l'un localisé au point de la région de transition LE/LC (0,58 nm²mol⁻¹) et le second à la fin de la région de transition LC/SC (0,48 …
Nous présentons l'étude du processus d'orientation d'une sonde de fluorescence, le 12-9(AS), dans une monocouche de DPPC à l'interface air/solution. Ce processus est représenté par un paramètre d'orientation qui provient du rapport de deux constantes de diminution de la sonde obtenue par polarisation croisée de la lumière d'excitation. Ce paramètre d'orientation montre trois régions de configurations orientionnelles lors de la compression du film de DPPC. Ces régions sont séparées par deux changements abrupts du paramètre, l'un localisé au point de la région de transition LE/LC (0,58 nm²mol⁻¹) et le second à la fin de la région de transition LC/SC (0,48 …
Les propriétés mécaniques des BLM sont obtenues à partir de mesures électriques et interférométriques simultanées. L'application de pressions hydrostatiques (Php) très faibles entraîne la formation de franges d'interférence qui permettent le calcul du déplacement latéral (Ft) et du degré courbure (Fc) de la BLM. La pente de la courbe de Php vs Fc nous permet de déterminer la tension bifaciale de la membrane. De cette pente, nous pouvons aussi calculer les modules d'élasticité de courbure, d'épaisseur (Young) et de surface. La déformation de la BLM plane est donc induite par pression hydrostatique sans potentiel électrique appliqué. L'application d'un potentiel transmembranaire …
Les propriétés mécaniques des BLM sont obtenues à partir de mesures électriques et interférométriques simultanées. L'application de pressions hydrostatiques (Php) très faibles entraîne la formation de franges d'interférence qui permettent le calcul du déplacement latéral (Ft) et du degré courbure (Fc) de la BLM. La pente de la courbe de Php vs Fc nous permet de déterminer la tension bifaciale de la membrane. De cette pente, nous pouvons aussi calculer les modules d'élasticité de courbure, d'épaisseur (Young) et de surface. La déformation de la BLM plane est donc induite par pression hydrostatique sans potentiel électrique appliqué. L'application d'un potentiel transmembranaire …
L'existence de la bicouche lipidique dépend de l'équilibre des forces électrostatiques intermoléculaires. Il en résulte une organisation hétérogène de charges électriques dans la bicouche plane et près de sa surface. La mesure de la déformation des bicouches sur la surface peut se faire directement avec des multimètres sophistiqués. Toutefois, dans ce contexte, la bicouche fragile est rompue et provoque l'éclatement de la membrane. L'holographie apporte une technique optique moins perturbatrice. Des différences de potentiel de l'ordre du milli-volt sont appliquées sur les membranes ce qui génère des pressions électrostatiques suffisamment grandes pour les déformer de quelques microns. On enregistre alors …
La dynamique moléculaire du DPPC à l'interface air-eau a été étudiée à 11°C par la technique du retour de fluorescence après photovaporisation. La couche monomoléculaire est comprimée par une barrière mobile ou par addition successives de mélanges sonde-lipide (2:1, mole/mole) sur une surface fixe. Les propriétés du film de DPPC sont ainsi comparées selon les modes de compression en suivant trois paramètres: l'émission de fluorescence de la sonde, la constante de diminution de la photoextinction et le coefficient de diffusion latérale. Les principaux résultats que nous dérivons et commentons sont: a) les molécules de sonde sont associées en domaines dans …
La dynamique moléculaire du DPPC à l'interface air-eau a été étudiée à 11°C par la technique du retour de fluorescence après photovaporisation. La couche monomoléculaire est comprimée par une barrière mobile ou par addition successives de mélanges sonde-lipide (2:1, mole/mole) sur une surface fixe. Les propriétés du film de DPPC sont ainsi comparées selon les modes de compression en suivant trois paramètres: l'émission de fluorescence de la sonde, la constante de diminution de la photoextinction et le coefficient de diffusion latérale. Les principaux résultats que nous dérivons et commentons sont: a) les molécules de sonde sont associées en domaines dans …