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Colloque
La transformation des sucres en acides organiques par les streptocoques de la plaque dentaire est une cause importante de la carie dentaire. Cette transformation peut se faire à partir de sucre exogène ou par dégradation des réserves intracellulaires métabolisées sous forme de glycogène. Il est maintenant reconnu que ce dernier processus est un facteur étiologique important de la carie dentaire. C'est pourquoi nous avons entrepris l'étude du métabolisme de ce polyglucose chez trois espèces de streptocoques oraux: Streptococcus salivarius ATCC 25975, Streptococcus sanguis ATCC 10556 et Streptococcus mutans ATCC 27352 et chez des mutants spontanés de ces souches, altérés au …
Colloque
Le système de transport PTS phosphoryle le sucre pendant son transport et permet ainsi l'accumulation de sucres phosphorylés sans utiliser d'ATP puisque le donneur de phosphate est le phosphoenolpyruvate. Ce système est composé de plusieurs protéines, les unes solubles (EI et HPr), les autres liées à la membrane (complexes EII). Nous avons entrepris la purification de ces protéines chez S. salivarius. Les cellules sont cultivées dans un milieu trypticase-soya extrait de levure additionné de glucose 0.5%. À la fin de la phase exponentielle, les cellules sont récoltées et lavées. Un extrait cellulaire est obtenu par broyage des bactéries et d'albumine …
Colloque
La production d'acides organiques résultant du catabolisme des sucres par les streptocoques de la plaque dentaire est un des facteurs étiologiques les plus importants de la carie dentaire. C'est pourquoi nous avons entrepris l'étude des systèmes de transport des sucres chez ces bactéries et du rôle de ces systèmes dans la régulation de l'activité de la biosynthèse des certains systèmes enzymatiques impliqués dans le métabolisme des glucides. Chez les bactéries anaérobies facultatives, le glucose est transporté par le système de phosphotransférase phosphoenolpyruvate dépendant (PTS). Nous avons isolé un mutant spontané de S. sanguis (streptocoque présent dans la plaque dentaire de …
Colloque
Le glutamyl-tRNA synthétase partiellement purifiée de cerveau de boeuf est associée à des complexes de poids moléculaire de plus de 10^6, et catalyse la formation du Glutamyl-tRNA à une vitesse initiale beaucoup plus lente qu'une vitesse constante atteinte après 5 min. Toutefois, l'aminoacylation du tRNA est inhibée par l'addition de dithiothreitol et seulement si les complexes enzymatiques ont été pré-incubés en présence de glutamate, ATP et t^32P. Après une pré-incubation, ces complexes avec le γ-methyl-L-glutamate, un inhibiteur compétitif de Glutamyl-tRNA synthétase, l'enzyme est beaucoup plus lente qu'après une pré-incubation avec le glutamate et l'ATP, mais atteint la même vitesse constante. …
Colloque
Nous avons purifié la GluRS de cerveau de boeuf environ 400 fois par centrifugations différentielles, précipitation au sulfate d'ammonium, et chromatographies successives sur colonnes de sépharose 6B et hydroxyapatite. Environ 30% de l'activité de cet enzyme est fortement associée à la fraction membranaire, et le reste migré sur sépharose 6B comme un complexe de haut poids moléculaire contenant également de la glutamate déshydrogénase. Ce complexe pénètre pas dans un gel de 7% de polyacrylamide et 0.1% sodium laurylate (Davis (1964) Ann. New York Acad. Sci. 121, 404-427) L'enzyme est stabilisée par 5mM 2-mercaptoéthanol, 0.1mM EDTA et 15% glycérol. Son pH …
Colloque
Après purification, le centre photochimique donne 3 bandes à l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de SDS. La somme des poids moléculaires de ces 3 bandes est d'environ 75,000. Cependant, le poids moléculaire minimum calculé à partir du coefficient d'extinction molaire du centre photochimique à 870 nm et de la quantité de protéine est de 90,000. Enfin, le poids moléculaire apparent déterminé par chromatographie sur colonne de Sepharose 6-B est de 145,000. Par détermination de la quantité de détergent fixé sur la protéine, du volume spécifique du détergent et celui de la protéine, nous avons pu déterminer le poids …
Colloque
Les chromatophores sont obtenus par broyage des bactéries, suivi de centrifugations différentielles. Le centre photochimique P870 est obtenu par solubilisation au détergent ODDMA. Chez le mutant, le complexe est très sensible à la lumière et à la température en présence d'ODDMA et ne résiste pas à la précipitation aux sels d'ammonium. Il est donc purifié par adsorption sur gel de DEAE Sephadex 450 et élué par paliers de concentrations de NaCl 0.1M et 0.2M contenant du Triton X100 (0.1 %). On obtient ainsi un complexe de pureté équivalente aux meilleures préparations connues.
