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Plusieurs travaux ont souligné l'intervention possible des topoisomérases dans la réplication de l'ADN. Il est également connu que les fibroblastes humains cessent de répliquer leur ADN et de se multiplier après une cinquantaine de passages in vitro. En comparant la fidélité et l'efficacité des topoisomérases associées à la chromatine de cellules entre les passages 2 et 43, il nous a semblé possible de relier modification de conformation et réplication de l'ADN. Peu importe le niveau de dédoublement cellulaire, une topoisomérase de type I demeure toujours aussi efficace pour encocher et refermer une chaîne simple de nucléotides. Le relâchement de molécules …
L'acide désoxyribonucléique (ADN) obtenu par microextraction de cellules infectées par l'adénovirus canin (CAV) de type 1 ou 2 a été cillé par plusieurs endonucléases de restriction. Les produits de digestion ont été séparés par électrophorèse en gel d'agarose et certaines différences subtiles ont pu être observées dans les patrons de clivage de CAV-1 et CAV-2. L'identification rapide et précise de nombreux isolats cliniques obtenus de chiens souffrant d'infections respiratoires pourrait donc être accomplie par l'analyse des fragments de restriction.
Plusieurs travaux ont souligné l'intervention possible des topoisomérases dans la réplication de l'ADN. Il est également connu que les fibroblastes humains cessent de répliquer leur ADN et de se multiplier après une cinquantaine de passages in vitro. En comparant la fidélité et l'efficacité des topoisomérases associées à la chromatine de cellules entre les passages 2 et 43, il nous a semblé possible de relier modification de conformation et réplication de l'ADN. Peu importe le niveau de dédoublement cellulaire, une topoisomérase de type I demeure toujours aussi efficace pour encocher et refermer une chaîne simple de nucléotides. Le relâchement de molécules …
Une étude comparée de deux souches de Bacillus globigii en coloration négative au microscope électronique a permis la mise en évidence de particules phagiques chez cette bactérie. Ces particules peuvent être rapprochées du groupe Al correspondant aux bactériophages de la famille des myoviridés à tête isométrique. Les préparations obtenues des deux souches bactériennes ont montré des structures phagiques d'une longueur totale de 250 nm avec une tête à contour hexagonal de 45 nm de diamètre de sommet à sommet, et une queue de 7 nm de diamètre environ, possédant une gaine contractile de 140 nm de longueur par 22 nm …
Les appareils à gels horizontaux permettent une séparation efficace et reproductible de molécules d'ADN de tailles ou de conformations différentes, à la condition qu'un contact étroit entre le gel et les électrodes soit établi. La plupart des matériaux employés jusqu'à maintenant pour établir ce contact électrique ont tendance à se désécher durant l'électrophorèse, ce qui provoque une chute importante de voltage entre les deux extrémités du gel et nuit à l'interprétation des résultats. Un tissu fait de fibres de rayonne entremêlées a été utilisé comme transporteur de courant pour la séparation de molécules d'ADN viral fragmentées par des désoxyribonucléases de …
Les topoisomérases procaryotes ou eucaryotes, de types I et II, sont des enzymes qui modifient la conformation de l'ADN dans des conditions différentes. La topoisomérase de type I catalyse l'isomérisation de molécules d'ADN torsadées en molécules circulaires relâchées, alors que celle de type II effectue l'opération inverse en présence d'ATP. Nous avons découvert chez S. faecalis une topoisomérase de type I qui, contrairement aux enzymes bactériennes connues, fonctionne à haute force ionique (400 mM NaCl). Similaire en ce point aux topoisomérases eucaryotes, elle requiert toutefois des ions Mg++ (2-10 mM) pour fonctionner convenablement. Cette enzyme appartient donc à une catégorie …
La transfection de cellules avec de l'ADN est une technique d'une importance capitale pour le clonage de gènes et l'étude de leur expression au niveau moléculaire. Cependant, l'aspect préservation des cellules a toujours été négligé dans ces expériences. En effet, la transfection est une infection permettant de conserver le maximum de cellules viables a donc été mise au point. Les cellules Véro (rien de singe) ont été utilisées comme indicateurs à cause de leur sensibilité relative au CaCl2. Nos résultats montrent que l'exposition du feuillet cellulaire à une solution de glycérol avant l'addition d'ADN SV40 précipité par le CaCl2 diminue …
L'insertion d'un fragment d'ADN étranger dans le site Hind III du plasmide pAT153 inactive partiellement le gène tet, responsable de la résistance de Escherichia coli à la tétracycline. En présence de 80 μg/ml d'ampicilline et 4 μg/ml de tétracycline, les bactéries HB101 porteuses d'un plasmide recombinant forment sur agars complets, des colonies de taille inférieure à celles contenant le plasmide sauvage. Cette différence phénotypique importante nous a permis d'obtenir en quelques jours plusieurs centaines de plasmides dans lesquels des fragments Hind III de l'ADN du cytomégalovirus humain avaient été insérés. Dans les conditions actuelles, plus de 70% des petites colonies …
La chromatine virale extraite de cellules de singe (MA) infectées par le virus simien 40 (SV40) a été sédimentée en gradient neutre de saccharose, avant et après digestion par la DNase I, et l'activité ADN topoisomérase (TI) présente dans chacune des fractions a été évaluée par électrophorèse sur gels. Les résultats obtenus montrent l'absence d'activité TI dans la partie inférieure du gradient après traitement de la chromatine virale à la DNase, ce qui confirme l'association étroite de la topoisomérase à l'ADN SV40. Ce type d'association est en accord avec le rôle attribué à la topoisomérase dans la réplication de l'ADN …
L'analyse de mutants de Escherichia coli sensibles à l'ozone nous a permis de localiser le gène responsable de cette sensibilité (ozrA). Des études d'alimentation, de dégradation de l'ADN et de réactivation de phages traités à l'ozone indiquent que le gène ozrA joue un rôle dans l'entretien de l'ADN. Ce rôle diffère clairement de celui des gènes UVR (résistance aux ultraviolets -UV-) et exr (résistance aux rayons x -RX-). De plus les résultats, de paire avec l'obtention de mutants ozs (sensibles à l'ozone -R/X- et résistant aux RX-) ou OZR-RXS-UVS, dissocient les effets de l'ozone des effets déjà connus des ultraviolets …