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Colloque
Au cours de l'infection d'E. coli par le phage T7 alkylé, nous avons observé une multiplication ralentie du phage, une lyse retardée et incomplète des bactéries et une production diminuée de phages infectieux. Dès le début de l'infection, la surface des bactéries est perméable. Pour mieux comprendre ces changements, nous avons analysé: 1. La perméabilité de la membrane bactérienne, 2. La prophagie des phages alkylés. Dans un premier temps, nous avons infecté avec le phage alkylé des bactéries marquées au 32P et nous avons ensuite suivi la libération de radioactivité dans le milieu extracellulaire. Les cellules infectées par le phage …
Colloque
Le phage T7 alkylé par le méthanesulfonate de méthyle (MMS) est capable d'infecter Escherichia coli. Cependant, son action sur la bactérie-hôte et les événements accompagnant son développement restent inconnus. Nous avons donc entrepris l'étude de la multiplication du phage T7 alkylé. Après infection d'E. coli par des phages traités ou non par le MMS, nous avons déterminé le temps de latence et la durée de la période de libération des phages. Nous avons mesuré, en plus, le rendement moyen obtenu par bactérie et la cinétique de synthèse du DNA phagique. Dans nos conditions expérimentales, le phage alkylé (inactivé à 95%) …
Colloque
Afin de mieux comprendre l'action des agents alkylants sur le phage T7, nous avons étudié l'influence du génotype bactérien sur l'inactivation du phage T7 alkylé. Nous avons choisi, pour cette étude, des souches d'Escherichia coli ayant des défauts dans la DNA polymérase I et dans l'endonucléase II, deux enzymes impliquées dans la réparation du DNA alkylé. Le phage T7 a été traité par le méthanesulfonate de méthyle, et après dialyse, il a été incubé pendant des temps variables à 30°. Les titres du phage traité et du phage témoin ont été mesurés sur les quatre souches suivantes: AB1157 (type sauvage), …
Colloque
Nous avons montré que l'alkylation du phage T7 par le méthanesulfonate de méthyle empêche le phage d'injecter, dans la bactérie-hôte, la totalité de son DNA. Par des expériences de fréquence génétique, nous avons tenté d'identifier les segments de DNA injectés par le phage alkylé. Ces expériences ont montré que la fréquence de recombinaison de tous les gènes est diminuée par alkylation; en plus, les gènes tardifs sont plus affectés que les gènes précoces. Pour éclaircir ces résultats, nous avons déterminé les génotypes des phages produits dans les expériences de recombinaison. Les tests de complémentation ont démontré la présence du même …
Colloque
L'alkylation du DNA diminue son activité matrice pour la transcription. Pour mieux comprendre le mécanisme de cette diminution, nous avons caractérisé le RNA produit in vitro à partir du DNA alkylé. Le DNA purifié du bactériophage T7 est alkylé par le méthanesulfonate d'éthyle ou le méthanesulfonate de méthyle. Ce DNA est ensuite employé comme matrice pour la synthèse in vitro du RNA. Après extraction, le RNA est analysé par électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Bien que la dose d'alkylant nécessaire pour réduire l'activité matrice du DNA soit semblable pour les deux agents alkylants, leurs mécanismes d'action semblent très différents. La …
