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Colloque
Pour une étude de réactions sur des surfaces caractérisées au moyen de techniques d'analyse de surface, nous montons une installation pour effectuer l'analyse en masse des produits de désorption obtenus en fonction de la température (TDS). A cette fin nous avons développé un système basé sur celui de Stroscio et al. (R.S.I. 55, 732 1984), permettant de contrôler de manière avec précision la température de l'échantillon sur une gamme très étendue. L'échantillon est fixé sur un support de tantale servant à son chauffage. Un thermocouple permet de déterminer la température et cette lecture est amplifiée et comparée à une rampe …
Colloque
Chez la plupart des mammifères, les aminoacyl-tRNA synthétases se retrouvent sous forme de complexes de poids moléculaire très élevé. Par exemple, la glutamyl-tRNA synthétase purifiée partiellement à partir du cerveau de bœuf est associée à un complexe de 5x10^6 daltons. De plus, elle catalyse la formation du glutamyl-tRNA à une vitesse initiale beaucoup plus lente que la vitesse constante finale. (Vadekonbour et Lapointe (1980). Eur.J.Biochem. 109,581-587). Nous avons donc cherché à déterminer quel type de cellules étaient responsables de ce phénomène. Pour ce faire, nous avons repris les études cinétiques d'aminoacylation avec des complexes partiellement purifiés à partir des cellules …
Colloque
Les niveaux des enzymes responsables de l'assimilation de l'ammoniaque, i.e. les deux glutamine synthétases (GSI et GSII), la glutamate synthase (GOGAT) et la glutamate déshydrogénase (GDH) ont été mesurés chez les bactéroïdes purifiés de mutant A222 de R. meliloti ayant dans la nitrate réductase et chez les souches de parentale A22. Les activités spécifiques de GDH et de GOGAT étaient les mêmes dans les deux souches mais celle de la GS (GSI + GSII) était quatre fois plus élevée chez le mutant que chez la souche sauvage. L'activité spécifique de la GS (majoritairement la GSI) fut déterminée dans des extraits …
Colloque
En essayant de séparer par chromatographie sur DEAE-Sephacel les deux pics de tRNAGlu de E. coli observés par Nishimura en 1972 (Procédures in Nucleic Acids Research, vol. 2, p.542), nous avons obtenu qu'un seul pic étroit de tRNAGlu à partir de tRNA non fractionné et renaturé. Les deux pics attendus n'étaient observés que si un mélange de tRNA dénaturé et renaturé était chromatographié. Ces résultats indiquent que le prétendu tRNAGlu, pour lequel une séquence de nucléotide différente que pour la base de celle de tRNAGlu majeur a été rapportée par Uziel et Weinberger (Nucleic Acids Res. 2, 469 (1975)), est …
Colloque
Nous voulons déterminer le mécanisme de régulation des enzymes du métabolisme du glutamate dans le cerveau. Pour cette étude, nous avons utilisé des cellules gliales (C6) et neuronales (Neuro-2a) en monoculture. Nous avons déterminé une activité glutamine synthétase (GS) très faible lorsque les cellules gliales sont cultivées en présence de glutamine. Lorsque les cellules sont cultivées en absence de glutamine, l'activité GS reste très faible dans les cellules gliales C6 mais augmente dans les cellules Neuro-2a. Nos résultats diffèrent de ceux obtenus dans les cultures d'astrocytes primaires qui montrent que la GS est localisée exclusivement dans les cellules gliales. Ces …
Colloque
Nous avons purifié la GluRS de cerveau de boeuf environ 400 fois par centrifugations différentielles, précipitation au sulfate d'ammonium, et chromatographies successives sur colonnes de sépharose 6B et hydroxyapatite. Environ 30% de l'activité de cet enzyme est fortement associée à la fraction membranaire, et le reste migré sur sépharose 6B comme un complexe de haut poids moléculaire contenant également de la glutamate déshydrogénase. Ce complexe pénètre pas dans un gel de 7% de polyacrylamide et 0.1% sodium laurylate (Davis (1964) Ann. New York Acad. Sci. 121, 404-427) L'enzyme est stabilisée par 5mM 2-mercaptoéthanol, 0.1mM EDTA et 15% glycérol. Son pH …
Colloque
L'aminoacylation du tRNA(Glu) est catalysée selon un mécanisme qui ne permet pas de détecter un intermédiaire "Enzyme-AMP-acide aminé" avec les techniques qui révèlent généralement l'existence d'un tel complexe pour d'autres aminoacyl-tRNA synthétases (aaRS). Cette particularité de la GluRS pourrait indiquer que son mécanisme d'aminoacylation est soit en une seule étape, soit en deux étapes successives (comme pour la majorité des autres aaRS) avec la différence que le tRNA(Glu) serait requis pour la formation du complexe "GluRS-AMP-glutamate". Afin de distinguer entre ces deux modèles, nous avons étudié dans diverses conditions les vitesses d'aminoacylation du tRNA(Glu), de déacylation du glutamyl-tRNA en présence …
Colloque
Nous avons purifié 16 glutamyl-tRNA synthétase (GluRS) de Bacillus subtilis (B.s.). L'électrophorèse de cet enzyme en présence de SDS révèle la présence d'une seule polypeptide de poids moléculaire 68,000 et d'une activité de 16,000. Cette structure est analogue à celle des GluRS de Escherichia coli dont le poids moléculaire est de 56,000 qu'on retrouve sous forme associée à une protéine de fixation de 21,000 moléculaire 16,000 (J. Biol. Chem. 1982-85 (1972)). Lorsque la GluRS de B.s. est fractionnée par chromatographie sur RPC-5, deux fractions (pics) peuvent être séparées par la GluRS de E. coli. En conclusion, la GluRS de B.s. …
Colloque
Alors que chez les Procaryotes les aminoacyl-ARNAs synthétases sont des enzymes "solubles" dont les poids moléculaires sont de l'ordre de 50,000 à 300,000 daltons, chez les cellules animales on les retrouve dans des complexes de hauts poids moléculaires (environ 2 x 10^6 daltons); ces complexes sont soit libres, soit associés aux ribosomes. Afin d'étudier le rôle physiologique de ces associations, nous avons comparé les propriétés de l'arginyl-ARNAsynthétase (ArgRS) libre ou associée aux polysomes. L'activité spécifique de l'ArgRS dans les polysomes libres (P.L.) est de 1,05 fois et 2,8 fois plus grande que dans les polysomes liés aux membranes. La stabilité …
Colloque
Nous avons montré précédemment que chez E. coli K12 la glutamate synthase est déréprimée dans des mutants thermosensibles (ts) et des mutants Sm-dépendants de la glutamyl-tRNA synthétase lorsque ceux-ci croissent dans des conditions partiellement restrictives. Afin de vérifier l'hypothèse selon laquelle le glutamyl-tRNA pourrait jouer un rôle dans la répression de la synthèse de la glutamate synthase, nous avons mesuré dans la souche parentale et dans divers mutants de la glutamyl-tRNA synthétase, le niveau de la glutamate synthase et les concentrations de tRNA Glu chargé et non chargé dans des conditions de croissance permissives et partiellement restrictives. Dans le mutant …
