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Colloque
Nous avons étudié la décoloration de la chlorophylle a à l'état stationnaire dans les complexes chlorophylle-protéine CP-1 (P-700 chlorophyll a-protein complex) et LHCP (light-harvesting chlorophyll a/b-protein complex) de l'orge (Hordeum vulgare) et de Chlamydomonas reinhardtii. La décoloration a aussi été suivie dans les membranes chloroplastiques de l'orge de type sauvage, du mutant Chlorina f2 et de la plante traitée à l'herbicide Norflurazon (SAN-9789). On remarque, dans l'ensemble des cas étudiés, la décoloration successive de deux types de chlorophylle a. Le spectre de différence entre l'échantillon avant et après décoloration indique que les formes de chlorophylle absorbant aux longueurs d'ondes les …
Colloque
Des fragments Bam HI ont été insérés dans le site de résistance à la tétracycline du plasmide pBR322 et introduits dans E. coli. Nous avons utilisé deux méthodes pour caractériser les produits des gènes codés par ces segments d'ADN chloroplastique: un système couplé de transcription-traduction (S-30 de E. coli) et un système utilisant les "minicells" produites par le mutant E. coli P678-54. Dans chacun de ces cas, la comparaison des synthèses a été faite en utilisant des plasmides hybrides dont les fragments sont orientés dans les deux sens par rapport au promoteur de la tétracycline. Certains produits de traduction sont …
Colloque
Nous avons synthétisé l'ADN complémentaire simple brin de l'ARN viral polyadénylé in vitro et homopolymérisé par le dATP les hybrides RNA-DNA hétérogènes obtenus. L'insertion directe des hybrides de ces fragments a été faite dans le site Bam HI, du gène de résistance à la tétracycline de pBR322, homopolymérisé par le dTTP. Après transformation d'E. coli HB101 par les plasmides hybrides, différents clones correspondants à des insertions d'environ 1600, 1200, 980, 700 et 500 paires de bases ont été sélectionnés par leur résistance à l'ampicilline et leur sensibilité à la tétracycline. Nous poursuivons actuellement l'hybridation moléculaire des clones marqués au dCTP-32P …
Colloque
L'inhibition de la synthèse in vivo des tRNA chloroplastiques par la rifampicine est un phénomène bien connu chez Chlamydomonas. Nous avons rapporté (F.J.B. (1979) 96, 125-129) que la rifampicine inhibe totalement les synthèses des RNA chloroplastiques chez les mutants résistants à la rifampicine. Nous présentons des résultats qui montrent qu'il est possible d'isoler un extrait soluble qui synthétise in vitro des RNA chloroplastiques sensibles à la rifampicine, son insensibilité à l'α-amanitine, sa spécificité face aux ions métalliques des exigences en cations et en force ionique. Vue l'impossibilité d'isoler des chloroplastes intacts chez Chlamydomonas, la sensibilité à la rifampicine permet de …
Colloque
Les nombreux isolats du virus de la mosaïque du tabac (TMV) peuvent être associés en plusieurs groupes d'affinité. Le groupe I du tabac peut comprendre les souches U1, U2 et U6 qui diffèrent beaucoup quant à leur virulence mais qui semblent très rapprochées biochimiquement. C'est pourquoi nous comparons les souches U1, U2 et U6 selon les critères suivants : 1) symptomologie sur divers cultivars de tabac, 2) composition en acides aminés et en bases des protéines et des ARN de la protéine de la capside, 3) électrophorèse et analyse des fragments, 4) des ARN marqués in vivo et in vitro, …
Colloque
L'excitation des membranes photosynthétiques par la lumière induit une multitude de changements qui permettent sa transition à un état dit "excité". Nous avons déjà rapporté (BRC (1979), 88 (3), 797-803) que la phosphorylation de polypeptides des thylakoïdes semblait un nouveau phénomène relié à cette activation des membranes. Ces présentations détaillent des évidences de l'implication de la phosphorylation protéique dans l'activation photosynthétique. L'activité de l'hydroxylase du tryptophane est augmentée de 32% dans la fraction protéique, par le DCMU et l'ammonium oxalate et l'utilisation de l'ATP-32P expose encore plus l'augmentation de la photophosphorylation de l'ATP, dans notre étude. Nous avons observé, lors …
Colloque
Les membranes photosynthétiques représentent, de par leur nature de transducteur énergétique, un intéressant système de transition d'un état fondamental et excité. De nombreux événements photochimiques, moléculaires et ultrastructuraux ont été rapportés en ce qui concerne cette phase de transition. Nos travaux ont mis en lumière un nouveau phénomène lié à cette activation des membranes photosynthétiques, la phosphorylation de polypeptides. Des études de ce système à 32P nous ont permis de découvrir que ce phénomène était lié à l'irradiation et que des accepteurs de la photophosphorylation (CCCP) avaient une influence significative. Nous avons pu établir que ce phénomène des thylakoïdes à …
Colloque
Des cellules de Chlamydomonas reinhardtii traitées au toluène à 0°C et 25°C incorporent des ribonucléosides triphosphates (NTP) dans leur RNA chloroplastique à 25°C et 35°C in vitro. L'incorporation requiert les quatre NTP, du Mg++, elle est complètement inhibée par la DNase, la RNase, l'AMP et est inhibée de 90% par la rifampicine (350 µg/ml). Cependant l'incorporation est presque complètement insensible à l'amanitine et au chloramphénicol à 200 µg/ml. Ces résultats montrent que celles traitées au toluène synthétisent principalement le RNA chloroplastique. Ce système est exclusif en vitro, car seulement l'analyse de la RNA polymérase chloroplastique in vivo est possible. En …
Colloque
La cellule végétale présente une intéressante intégration de trois appareils génétiques distincts: nucléaire, mitochondrial et chloroplastique. Dans le but d'étudier les mécanismes d'interactions nucléocytoplasmiques nécessaires à la biogenèse du chloroplaste, nous nous sommes attachés à isoler, purifier et caractériser ces organelles chez un unicellulaire, Euglena gracilis. Des tests photchimiques d'intégrité structurale nous ont permis de vérifier la qualité et le degré de préservation des chloroplastes, alors que différents tests de transfert électronique entre les 2 photosystèmes (H2O > DPIP, DPIP > MV, H2O > MV) nous ont permis d'identifier le cytochrome déficient dans les chaînes de transporteurs électroniques. Ces tests …
Colloque
Chez les végétaux verts (dont Euglena Gracilis), la synthèse des protéines fait appel à 2 systèmes; l'un basé sur le ribosome cytoplasmique de type eucaryotique et l'autre basé sur le ribosome chloroplastique de type procaryotique. Nous avons identifié les 2 types de ribosomes en présence, leur répartition et leur localisation dans la cellule: les ribosomes cytoplasmiques, en majorité, se trouvent libres dans le cytoplasme ou liés aux membranes du réticulum endoplasmique; les ribosomes chloroplastiques sont liés aux membranes thylakoïdes du chloroplaste et coexistent pour une même évaluation des ribosomes totaux. Les protéines synthétisées par les ribosomes cytoplasmiques sont adressées au …
